龟鹿二仙胶通过Keap1/Nrf2通路抑制自噬、减轻小鼠GC-1精原细胞氧化损伤

作     者：丁劲 盛文 傅伟 林美欣 李波男 周兴 何清湖 Jin Ding;Wen Sheng;Wei Fu;Meixin Lin;Bonan Li;Xing Zhou;Qinghu He

作者机构：湖南中医药大学中西医结合学院 湖南中医药大学男科实验室 广州中医药大学第七临床医学院附属宝安中医院 湖南医药学院 

出 版 物：《Journal of Traditional Chinese Medical Sciences》 (中医科学杂志（英文）)

年 卷 期：2023年第10卷第4期

页      面：484-492,527页

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：supported by the National Natural Science Foundation of China(81774324) the Fundamental Research Project of Medical and Health in Shenzhen Bao’an District(2022JD224) the Special Research and Development Project for Traditional Chinese Medicine Preparations of Shenzhen Bao’an District Hospitals(2022KJCX-YYZJ-6) 

主　　题：男性不育 氧化损伤 中医药 龟鹿二仙胶 自噬 Keap1/Nrf2通路 

摘      要：目的:探讨龟鹿二仙胶(Guilu Erxian glue,GLEXG)对氧化损伤小鼠GC-1精原(mouse GC-1 spermatogonial,MGS)细胞模型的影响及潜在作用机制。方法:过氧化氢(H_(2)O_(2))处理MGS细胞构建氧化损伤细胞模型。通过细胞计数试剂盒-8测定法评估细胞活力。运用流式细胞术和酶联免疫吸附测定分别检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平。通过蛋白印迹和免疫荧光测定sequestosome-1(p62)、核因子红细胞相关因子2(Nrf2)、微管相关蛋白轻链3β(LC3B)和Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)的表达。通过实时定量聚合酶链反应评估Keap1相对mRNA的表达。通过透射电子显微镜(TEM)观察自噬相关囊泡的结构变化。结果:H_(2)O_(2)诱导的氧化损伤细胞模型表现出细胞活力下降,ROS和MDA水平升高。10%浓度GLEXG含药血清治疗后细胞活力显著上升(P=0.0002),ROS和MDA水平显著下降(P=0.0105和P=0.0033)。在雷帕霉素处理的MGS细胞中,GLEXG治疗可显著上调p-mTOR、Nrf2和p62蛋白表达(均P0.01),下调Keap1蛋白表达和LC3B-II/LC3B-1比值(P=0.002和P=0.0043),并可降低细胞内ROS和MDA水平。TEM分析显示GLEXG治疗显著减少雷帕霉素处理的MGS细胞中异常增大的自溶体数量。在Keap1-siRNA转染的MGS细胞中,siRNA-Keap1-2311敲除位点显示出更高的效率。此外,在这些Keap1-siRNA转染的细胞中,GLEXG治疗可显著上调Nrf2和p62的蛋白表达,下调Keap1蛋白表达和LC3B-II/LC3B-I比值,并降低细胞内ROS和MDA水平。结论:GLEXG通过Keap1/Nrf2通路抑制自噬,有效减轻MGS细胞模型的氧化损伤。