新型冠状病毒Omicron I1566V突变位点MS2噬菌体病毒样颗粒的构建

作     者：杨静远 李永鑫 史茜 刘春燕 梁梦洁 张新 YANG Jingyuan;LI Yongxin;SHI Qian;LIU Chunyan;LIANG Mengjie;ZHANG Xin

作者机构：石河子大学医学院新疆石河子832000 新疆生产建设兵团医院/石河子大学医学院第二附属医院检验科新疆乌鲁木齐830002 

出 版 物：《检验医学与临床》 (Laboratory Medicine and Clinic)

年 卷 期：2024年第21卷第8期

页      面：1030-1034页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家临床重点专科建设项目[兵财社(2023)16号] 兵团临床医学研究中心建设项目[兵科发(2023)12号] 兵团重点领域科技攻关计划项目(2022AB030) 新疆生产建设兵团医院院级科技计划项目(2022014) 

主　　题：新型冠状病毒变异株 Omicron I1566V突变位点 反转录聚合酶链反应 MS2噬菌体 病毒样颗粒 

摘      要：目的构建新型冠状病毒Omicron I1566V突变位点MS2噬菌体病毒样颗粒。方法选取并合成带有6×His标签的MS2噬菌体的衣壳蛋白(CP)、成熟蛋白(A蛋白)及Omicron I1566V突变基因序列,插入pACYCDuet-1质粒构建重组载体,通过原核系统诱导表达目的蛋白,纯化重组蛋白后利用透射电镜对蛋白质进行物理表征,最后通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测病毒样颗粒的热稳定性及耐核酸酶水解能力。结果成功构建包含有6×His标签的CP、A蛋白和Omicron I1566V突变基因序列的重组载体,经限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ酶切鉴定和测序验证,结果均与预期相符。经诱导并纯化后,通过电镜观察到了大小均匀、直径为23~28 nm的病毒样颗粒,该病毒样颗粒经核酸酶消化后可在37℃条件下稳定储存20 d以上。结论该研究成功利用MS2噬菌体的CP和A蛋白构建了Omicron I1566V突变位点病毒样颗粒,为该突变位点的RT-PCR检测体系提供了可靠的质量保障。