具有广谱中和活性的新型冠状病毒受体结合结构域抗体的筛选和鉴定

作     者：倪婉琦 任莉 靳昌忠 杨馥榕 申玉敏 王硕 胡彩琴 郝彦玲 刘颖 朱彪 邵一鸣 李丹 王铮 NI Wanqi;REN Li;JIN Changzhong;YANG Furong;SHEN Yumin;WANG Shuo;HU Caiqin;HAO Yanling;LIU Ying;ZHU Biao;SHAO Yiming;LI Dan;WANG Zheng

作者机构：传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003 南开大学药学院天津300071 天津国际生物医药联合研究院天津300457 

出 版 物：《中国热带医学》 (China Tropical Medicine)

年 卷 期：2024年第24卷第3期

页      面：258-264页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.92369103) 北京市自然科学基金项目(No.M21015) 中国疾病预防控制中心青年科研基金(No.2022A105) 

主　　题：新型冠状病毒 中和抗体 受体结合结构域 

摘      要：目的从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coro‐navirus 2,SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法以生物素化的RBD为分子探针,利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)进行单克隆B细胞分选,将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后,采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增,扩增产物分别克隆至对应的表达载体,随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达,利用Protein A柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株(WT)假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度(IC_(50))0.1µg/mL的抗体,进一步在原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒中进行中和能力及宽度测试。结果从2名康复者体内共获得21个RBD特异性单克隆B细胞,从中分离出13对抗体轻/重链,成功表达出9个抗体,P1-A1、P1-B6、P1-B9对原始株(WT)假病毒IC_(50)值均低于0.1µg/mL,其中P1-B6可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒,IC_(50)值均达到了0.01µg/mL。P1-B9可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)、Delta株(B.1.617.2)及Gamma株(P.1)活病毒,IC_(50)值分别为0.42、0.63、0.28、2.50µg/mL。此外,P1-B6对BA.5、BF.7假病毒具有较好的中和效果,IC_(50)值分别为0.06µg/mL和0.09µg/mL。结论SARS-CoV-2原始株感染可以诱导出具有广谱中和活性的抗体,且这些广谱中和抗体的产生不需要过高的体细胞高频突变率,获得的抗体可以作为诊断和预防新冠病毒感染的候选。