线粒体转录因子A相关的微小RNA在结肠癌中的表达和增殖调控研究

作     者：吴恺明 何裕隆 李广华 彭建军 Wu Kaiming;He Yulong;Li Guanghua;Peng Jianjun

作者机构：中山大学附属第一医院胃肠外科中心广州510080 

出 版 物：《中华胃肠外科杂志》 (Chinese Journal of Gastrointestinal Surgery)

年 卷 期：2015年第18卷第10期

页      面：1041-1046页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：结肠肿瘤 微小RNA 线粒体转录因子A 细胞增殖 

摘      要：目的筛选并验证可调控结肠癌细胞增殖的微小RNA（miRNA）。方法以癌基因线粒体转录因子A（TFAM）作为靶基因，通过miRwalk2．0软件筛选可能调控结肠癌增殖的miRNA。通过实时荧光定量PCR检测miRNA在30例结肠癌手术标本和3种结肠癌细胞系（SW480、HT-29和HCT116）中的表达。选取其中表达量最低的miR．204和SW480进行后续研究。双荧光素酶报告基因实验验证TFAM和miR-204的作用关系。分别应用miR-204慢病毒和anti—miR-204慢病毒上调和下调miR-204的表达，通过Westernblot检测慢病毒感染后SW480细胞中TFAM蛋白水平的变化：并采用MTT实验和Brdu实验观察慢病毒感染后SW480细胞增殖能力的变化。结果初筛获得miR-204、miR-211、miR-214、miR-381、miR-590．3p5种miRNA，其中miR-204、miR-211、miR-214和miR-381在结肠癌组织中的表达较癌旁组织明显降低（P〈0．05），在3种结肠癌细胞中的表达亦较正常结肠细胞降低（P〈0．05），其中miR-204的表达量最低；而miR-590—3p表达水平则在结肠癌组织和3种结肠癌细胞中均明显上调（P〈0．05）。结肠癌组织中miR-204表达与TFAM表达呈显著负相关（P〈0．05）。双荧光素酶报告基因实验显示TFAM与miR-204可直接结合。通过慢病毒感染上调miR-204表达后，SW480细胞中TFAM蛋白表达下降，细胞增殖能力升高（P〈O．05）；下调miR-204表达后，TFAM蛋白表达升高，细胞增殖能力下降（P〈0．05）。结论miR-204可以通过降低TFAM的蛋白表达来抑制结肠癌细胞的增殖。