含恶性疟原虫Pf70基因片段表达载体DNA的免疫学特性

作     者：叶凯 李其岚 徐洪 Kironde Fred Alexander S 马辉文 

作者机构：武汉大学药学院 武汉大学生命科学学院 CRID ProjectsDepartment of BiochemistryMedical Schoolof Makerere University 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2003年第23卷第5期

页      面：359-363页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：联合国工业发展组织 /世界银行 /世界卫生组织资助项目 (TDR/RPCB/2 0 0 0 ) 

主　　题：疟疾 恶性疟原虫 Pf70基因 DNA疫苗 

摘      要：目的 研究恶性疟原虫Pf70DNA片段作为DNA疫苗候选抗原基因的可能性。方法 应用PCR方法从含有恶性疟原虫Pf70基因DNA片段的质粒pGEX Pf70中扩增出包含Pf70DNA片段的长度为 95 7bp的PCR产物。将其插入带有乙肝表面抗原基因的真核表达载体pCMV S中 ,构建出重组质粒pCMV S Pf70。用提纯的重组质粒pCMV S Pf70作为DNA免疫制剂 ,以质粒pCMV SDNA和经过谷胱甘肽亲和层析法纯化的融合蛋白GST Pf70作为对照 ,免疫昆明种小白鼠。每隔 14d加强免疫1次 ,加强免疫 2次后第 7天采小鼠全血 ,用流式细胞仪检测CD8+ T淋巴细胞和CD4 + T淋巴细胞的水平 ,以检测体液免疫和细胞免疫状况。结果 接种了重组质粒pCMV S Pf70小鼠CD8+ T淋巴细胞的绝对量增加 ,其百分比含量增加了 39% ;CD4 + T淋巴细胞的相对含量保持恒定 ,绝对量稍有增加。用ELISA法分别检测经重组质粒pCMV S Pf70免疫的小鼠和经融合蛋白GST Pf70免疫的小鼠血清中抗Pf70蛋白质的抗体滴度 ,发现前者抗体滴度约为 1∶80 0 ,远远低于后者的滴度 (1∶5 0 0 0 )。研究结果证明 ,重组质粒pCMV S Pf70DNA可以诱导小鼠产生很强的细胞免疫和相对于蛋白质免疫而言较弱的体液免疫 ;Pf70蛋白质可以诱导小鼠产生很强的体液免疫。