癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3单克隆抗体的制备及应用

作     者：王玉亮 刘涛 穆红 WANG Yuliang;LIU Tao;MU Hong

作者机构：天津市第一中心医院卫生部危重病急救医学重点实验室300192 

出 版 物：《天津医药》 (Tianjin Medical Journal)

年 卷 期：2014年第42卷第3期

页      面：235-237,I0008页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：天津市卫生局重点学科建设-重点实验室建设经费资助项目 国家临床重点专科建设项目资助课题 

主　　题：磷脂酰肌醇蛋白聚糖类 抗体,单克隆 重组融合蛋白质类 杂交瘤 细胞系 癌,肝细胞 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 单克隆抗体 GPC3 

摘      要：目的制备抗癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)单克隆抗体,并初步应用。方法利用PCR方法,将GPC3基因重组到原核表达载体pET16b中,在大肠杆菌中表达,纯化后的GPC3融合蛋白对Balb/c小鼠脾内包埋免疫,取小鼠脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合,应用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和Western blot法筛选及鉴定分泌特异性抗GPC3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接免疫荧光检测肝癌细胞中GPC3表达。结果成功构建了GPC3原核表达载体,在大肠杆菌中的诱导表达重组GPC3蛋白。应用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备1株稳定分泌抗GPC3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过Western blot鉴定具有高度的特异性,间接免疫荧光实验显示单克隆抗体能与HepG2细胞内GPC3特异性结合。结论成功制备出特异性抗人GPC3单克隆抗体。