离体大鼠心脏顺行性灌注荧光染料标记的抗体对传导系统荧光成像研究

作     者：任一飞 于锴 干昌平 

作者机构：广安市人民医院心脏大血管外科 四川大学华西医院心脏大血管外科 

出 版 物：《中国胸心血管外科临床杂志》 (Chinese Journal of Clinical Thoracic and Cardiovascular Surgery)

年 卷 期：2024年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：四川省卫生健康科研课题项目（20PJ052） 

主　　题：心脏传导系统 心律失常 生物成像 

摘      要：目的 初探经主动脉顺行性灌注荧光染料（Alexa Fluor 633）标记的超极化激活的环核苷酸门控阳离子电流通道蛋白4(HCN4)抗体和连接蛋白（connexin,Cx）抗体对大鼠心脏传导系统（cardiac conduction system,CCS）荧光成像的可行性，以及探究荧光染料最佳用量、灌注时间和光化学稳定性。方法 将33只雄性SPFSD大鼠建立离体大鼠心脏主动脉顺行性灌注模型，依次顺行性灌注一抗和二抗溶液，灌注达预定时间后观察房-室交界区并记录相应区域荧光强度。分别设置5组剂量梯度（每组3只大鼠），5组灌注时间梯度（每组3只大鼠），以及将3只大鼠在一定灌注剂量和时间下，设置10组LED连续光照时间梯度后观察并记录相应区域荧光强度。分别制作标准免疫荧光染色石蜡切片和冰冻切片，进行组织学对比分析。结果 房-室交界区可见一红色荧光信号聚集区域，经HCN4/Cx43半定量荧光强度分析以及组织学对比验证后，认为该结构为房室结（AVN）所在区域。随抗体剂量的增加，AVN/背景荧光强度比值各组间变化差异均无统计学意义（P0.05）。随抗体灌注时间的增加，该比值增大。随着暴露于光照时间的延长，该比值各组间变化差异无统计学意义（P0.05）。结论 经主动脉顺行性灌注抗体标记的荧光染料能成功对离体大鼠心脏CCS中的房室结进行成像；抗体剂量的增加，对房室结成像效果的影响并不显著；抗体灌注时间越长，房室结的成像效果越好；该荧光染料在长时间（8 h）暴露于光照后，仍能维持一定的房室结显影。