盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究

作     者：张学武 刘承宪 

作者机构：中国科学院上海植物生理研究所 

出 版 物：《Acta Botanica Sinica》 (Acta Botanica Sinica（植物学报：英文版）)

年 卷 期：1999年第41卷第3期

页      面：290-295页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071001[理学-植物学] 07[理学] 

主　　题：杜氏藻 纯化 动力学特性 G-3-P脱氢酶 

摘      要：利用ＰＥＧ分级，ＤＥＡＥ离子交换层析，ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析，ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段，分离纯化盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）甘油三磷酸（Ｇ３Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８），得到比活为１２．６Ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶，并对此酶的生化特性进行了研究。４％～２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ，ＳＤＳＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基，据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮（ＤＨＡＰ）还原的最适ｐＨ值为７．５，催化Ｇ３Ｐ脱氢的最适ｐＨ值为１０。该酶对４个底物还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ），二磷酸吡啶核苷酸（ＤＨＡＰ），辅酶Ⅰ（ＮＡＤ），Ｇ３Ｐ的表观Ｋｍ值分别为６３μｍｏｌ／Ｌ，２７２μｍｏｌ／Ｌ，１．５３ｍｍｏｌ／Ｌ，６．５２ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶在保存过程中易失活。ＮＡＤＨ能降低酶失活的速度，而ＮＡＤ则不然。低浓度ＮａＣｌ对酶略有保护作用，但高浓度ＮａＣｌ加快酶的失活，且浓度越高效应越明显。