基于PINK1-Parkin线粒体自噬通路探讨海昆肾喜含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用

作     者：孙妍华 季敬 彭娇 何珊 付先军 SUN Yan-hua;JI Jing;PENG Jiao;HE Shan;FU Xian-jun

作者机构：山东中医药大学药学院山东济南250355 海洋中药研究中心山东省高等学校海洋中药重点实验室山东中医药组学工程技术研究中心山东中医药大学山东济南250355 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2024年第40卷第3期

页      面：461-468页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 0710[理学-生物学] 1006[医学-中西医结合] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 071007[理学-遗传学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(No81903944) 国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目(No zyyzdxk-2023124) 山东省中医药重点学科建设项目[(No 2022)4号] 

主　　题：阿尔茨海默病 海昆肾喜含药血清 化浊排毒 线粒体自噬 PINK1-Parkin N2a/App695 

摘      要：目的研究海昆肾喜(haikun shenxi,HKSX)含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用及机制。方法制备HKSX含药血清,高效薄层色谱(high performance thin layer chromatography,HPTLC)对其成分进行分析。应用含药血清干预N2a/APP695细胞,MTT检测HKSX含药血清的细胞毒性;ELISA检测Aβ_(1-42)含量;JC-1法检测线粒体膜电位、DCFH-DA法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、ATP检测试剂盒检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)评价线粒体功能;免疫印迹法(Western blot)检测PTEN诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、Parkin、p62、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated-proteinlight chain-3,LC3)及p-Tau S396蛋白的表达;设置线粒体自噬抑制剂Mdivi-1干预组,Western blot检测PINK1、Parkin、p-Tau S396蛋白表达,ELISA检测Aβ_(1-42)含量,验证HKSX的神经保护作用是否与线粒体自噬密切相关。结果与模型对照组(MC)相比,HKSX低、中、高剂量组Aβ_(1-42)含量明显降低,高剂量组尤为明显(P0.01);线粒体膜电位及ROS含量明显降低(P0.01)、ATP含量升高(P0.01);PINK1、Parkin(P0.01)及LC3Ⅱ(P0.01)的表达增加,而p62的表达降低(P0.01),p-Tau S396蛋白亦降低(P0.01);而Mdivi-1的干预,在很大程度上抑制了HKSX对PINK1、Parkin蛋白的活化(P0.01)及对p-Tau S396和Aβ_(1-42)的清除(P0.01),表明HKSX的神经保护作用依赖于PINK1-Parkin信号通路。结论HKSX能够提高线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin蛋白的表达,激活线粒体自噬,提高线粒体功能,抑制Aβ及p-Tau S396蛋白在神经细胞中的沉积,发挥神经保护作用,从而起到防治AD的效果。