利用PCR-RFLP方法快速鉴别中国牛蒡属药用植物

作     者：黄彦昌 宋跃岳 许亮 郑汉 董玉玮 张娜 胡传银 窦德强 康廷国 HUANG Yanchang;SONG Yueyue;XU Liang;ZHENG Han;DONG Yuwei;ZHANG Na;HU Chuanyin;DOU Deqiang;KANG Tingguo

作者机构：辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室北京100700 徐州工程学院江苏徐州221018 徐州天马敬安食品有限公司江苏徐州221747 

出 版 物：《中华中医药学刊》 (Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2024年第42卷第12期

页      面：80-83,I0021页

学科分类：100703[医学-生药学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81874338) 中央本级重大增减支项目“名贵中药资源可持续利用能力建设项目”(2060302) 辽宁省“百千万人才工程”项目(2021921039) 

主　　题：牛蒡 毛头牛蒡 鉴别 PCR-RFLP 

摘      要：目的随着近十几年来国内学者对牛蒡属药用植物研究的深入,中国牛蒡属植物鉴定需要一种快速、准确的分子鉴别手段。因此研究拟通过利用聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length polymorphism,PCR-RFLP)建立一种快速鉴定中国牛蒡属药用植物的方法。方法通过对两种中国牛蒡属药用植物牛蒡与毛头牛蒡常用鉴定DNA条形码进行限制性核酸内切酶图谱分析,找到牛蒡在内源转录间隔区1(internal transcribed spacer-1,ITS1)片段中有一个单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphism,SNP)位点,正好为BsaAⅠ酶(YAC/GTR)的酶切位点,根据该酶切位点,设计引物对目标片段进行扩增。另外建立PCR体系:95℃预变性5min,循环反应40次(90℃20s,60℃20s,72℃20s),72℃延伸5min,4℃保温。建立限制性内切酶BsaAⅠ酶切体系,制作琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果电泳结果表明在经过BsaAⅠ酶切后牛蒡将会产生长度分别为101bp与125bp的短条带,而毛头牛蒡未被切开仍为226bp的长条带,成功将两种药用植物区分开。该方法简单、快速、准确,满足日常对中国牛蒡属植物的鉴定。结论该实验通过从牛蒡与毛头牛蒡的ITS1序列入手,利用PCR-RFLP技术首次完成了对两种植物的鉴别研究,建立了中国牛蒡属植物的PCR-RFLP鉴别方法。