一种可满足产业化需求的靶向EpCAM嵌合抗原受体慢病毒生产工艺

作     者：周文婷 邓公平 付舒翔 田方艳 吴珊珊 柏清玉 邓长云 唐颖鑫 朱淑英 张培湘 ZHOU Wenting;DENG Gongping;FU Shuxiang;TIAN Fangyan;WU Shanshan;BAI Qingyu;DENG Changyun;TANG Yingxin;ZHU Shuying;ZHANG Peixiang

作者机构：湖南远泰生物技术有限公司湖南长沙410221 海南省人民医院急诊科海南海口570311 

出 版 物：《中国医学工程》 (China Medical Engineering)

年 卷 期：2024年第32卷第3期

页      面：18-24页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：海南省重点研发计划项目(ZDYF2020228) 湖南省科药联合基金(2022JJ80019) 

主　　题：上皮细胞粘附分子 嵌合抗原受体 CAR-T细胞治疗 慢病毒生产 

摘      要：目的建立一种可满足产业化需求的靶向上皮细胞粘附分子(EpCAM)嵌合抗原受体(CAR)慢病毒生产工艺。方法以EpCAM蛋白为抗原,免疫小鼠获得EpCAM单抗,采用EpCAM单抗的scFv为胞外单链可变区,构建人源化靶向EpCAM的第三代CAR载体质粒,并通过EpCAM CAR载体质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK 293T细胞获得慢病毒粗毒液,粗毒液经核酸酶孵育、过滤澄清、Core 700层析、浓缩换液、除菌过滤、制剂分装等工序获得EpCAM慢病毒成品。结果通过EpCAM单抗成功构建了靶向EpCAM抗原的嵌合抗原受体Humanized EpCAM ScFv-CD28-CD3ζ-CAR,并通过该EpCAM CAR进行2 L悬浮体系慢病毒包装所收获粗毒液,经层析及超滤浓缩等纯化工艺收获慢病毒成品100 mL,成品慢病毒转导滴度达2.16×108 TU/mL,慢病毒总量达2.16×10^(10) TU。成功开发了可满足产业化需求的靶向EpCAM CAR慢病毒上游包装及下游纯化生产工艺。结论具有成本效益的慢病毒(LV)载体制备对于满足产业化需求至关重要,本研究在EpCAM蛋白、EpCAM抗体、及EpCAM CAR载体质粒的基础上,结合完整的慢病毒悬浮生产工艺,制备高滴度高纯度的靶向EpCAM嵌合抗原受体慢病毒,为EpCAM CAR-T细胞治疗实体瘤应用及其产业化奠定基础。