环磷酰胺不同剂量及停药周期构建小鼠卵巢早衰动物模型比较研究

作     者：莫金桦 胡鸿 颜秋霞 李鹏东 陈彩蓉 MO Jin-hua;HU Hong;YAN Qiu-xia;LI Peng-dong;CHEN Cai-rong

作者机构：广州医科大学附属清远医院(清远市人民医院)生殖医学中心清远511500 广州医科大学附属清远医院(清远市人民医院)中心实验室清远511500 

出 版 物：《生殖医学杂志》 (Journal of Reproductive Medicine)

年 卷 期：2024年第33卷第3期

页      面：365-372页

学科分类：07[理学] 0713[理学-生态学] 

基　　金：清远市人民医院开放课题项目(202301-104) 清远市人民医院医学科研基金项目(201904-10) 广东省医学科学技术研究基金项目(B2023064) 

主　　题：卵巢早衰 动物模型 环磷酰胺 

摘      要：目的比较环磷酰胺(CTX)不同剂量和停药周期构建的小鼠卵巢早衰(POF)动物模型,寻找最佳造模方式,为进一步研究POF提供更为适用的实验模型。方法8周龄动情周期规律的C57BL/6雌性小鼠共40只,随机分成5组:CON(对照组),CTX80(80 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX100(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX120(120 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX150(150 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续腹腔注射10 d,CON组注射生理盐水,其余组注射不同剂量CTX。记录小鼠体重、动情周期和卵巢脏器系数等,比较得出CTX诱导POF模型最佳暴露剂量。使用最佳CTX暴露剂量重新造模,随机分为模型组和对照组,分别在停药后第1、2、3、4周,检测血清性激素,计数各级卵泡等,比较得出CTX诱导POF模型最佳停药周期。结果(1)研究最佳造模剂量时,CTX150死亡2只,而CTX80小鼠仍有完整的动情周期,说明这两种剂量并非最佳。CTX各组在暴露过程中体重呈进行性下降,停止暴露后体重开始回升,但至停药第7天各组体重仍显著低于CON组(P0.05)。考虑到尽量缩小药物对实验动物伤害的伦理要求,得出CTX诱导卵巢早衰模型的最佳暴露剂量为100 mg·kg^(-1)·d^(-1)×10 d。(2)研究最佳停药周期时,模型组停药后第1、2、3、4周血清抗苗勒管激素(AMH)水平、雌二醇(E_(2))水平、原始卵泡、初/次级卵泡均显著低于同期对照组(P0.05),卵泡刺激素(FSH)水平在第1、3、4周均显著高于同期对照组(P0.05),而第1、2、4周的闭锁卵泡计数均显著高于同期对照组(P0.05),均表现出POF典型特征。随CTX停药周期延长,模型组小鼠原始卵泡、初/次级卵泡、成熟卵泡计数呈进行性下降,闭锁卵泡计数升高(P0.05),CTX对卵巢功能损害呈进行性加重。比较得出CTX停药1周是诱导POF模型最佳成模周期。结论CTX100 mg·kg^(-1)·d^(-1)连续暴露10 d是建立CTX诱导小鼠POF模型的最佳造模剂量,最佳成模周期为停药后1周。