Keap1/Nrf2信号通路在脂多糖诱导宫内感染致新生鼠支气管肺发育不良的作用机制

作     者：邓健 王少华 陈尊 邹振庄 Deng Jian;Wang Shaohua;Chen Zun;Zou Zhenzhuang

作者机构：广东省深圳市福田区妇幼保健院儿科深圳518045 

出 版 物：《中华妇幼临床医学杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Obstetrics & Gynecology and Pediatrics(Electronic Edition))

年 卷 期：2023年第19卷第6期

页      面：665-674页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：深圳市科技创新委自然科学基金项目(JCYJ20190813141207091、JCYJ20210324111806016、JCYJ20220530142015035) 

主　　题：Nrf2 脂多糖 宫内感染 支气管肺发育不良 大鼠 

摘      要：目的探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路,在脂多糖诱导宫内感染致新生鼠发生支气管肺发育不良(BPD)中的作用机制。方法选择12只无特定病原体(SPF)级6~8周龄Sprague Dawley(SD)雌性大鼠,以及建模成功2组孕鼠所产新生鼠为研究对象。将SD孕鼠采取数字表法随机分为BPD组(于孕龄为18 d时,腹腔注入脂多糖溶液构建BPD病理模型)和对照组(孕鼠腹腔注入等体积无菌生理盐水,构建空白对照模型),将其所产新生鼠采取随机数字表法,各选6只,分别纳入新生鼠BPD组与新生鼠对照组。①取2组新生鼠肺组织进行苏木精-伊红(HE)染色,采用HE染色观察其病理学变化;②采用生化检测氧化应激指标活性氧含量,相关抗氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及超氧化物歧化酶(SOD)活性;③采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测炎症因子,如肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β、-6和转化生长因子(TGF)-β水平;④采用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和Western blotting法检测Keap1/Nrf2信号通路Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA和蛋白表达水平。⑤采用SD大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(ACEⅡ)进行细胞实验:将SD大鼠ACEⅡ按照处理方法不同分为6组,分别为ACEⅡ+空载组(Cell+NC组)、ACEⅡ+Nrf2干扰组(Cell+Si-Nrf2组)、脂多糖组(LPS组)、脂多糖+空载组(LPS+NC组)、脂多糖+Nrf2干扰组(LPS+Si-Nrf2组)及对ACEⅡ不做任何处理的对照组(control组),流式细胞术检测各组活性氧表达水平。本实验获得深圳市福田区妇幼保健院医学伦理委员会批准(批准日期:2022-05-16),实验过程对动物的处置符合动物伦理学要求。结果①HE染色结果显示,BPD组肺泡体积增大,肺泡间隔增厚,并存在部分炎症细胞浸润、出血现象。BPD组肺组织平均线性截距(MLI)和肺泡间隔厚度(AST)均较对照组增大、增多,2组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。②生化检测结果显示,BPD组的活性氧表达水平显著高于对照组,GSH-PX及SOD酶活性显著低于对照组,并且差异均有统计学意义(P0.05)。③ELISA检测结果显示,BPD组TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。④qPCR及Western blotting检测结果显示,BPD组的HO-1 mRNA和蛋白表达水平均低于对照组,BPD组Nr2f2 mRNA相对表达水平低于对照组,并且差异具有统计学意义(P0.05)。⑤流式细胞术检测各组细胞活性氧水平显示,LPS+Si-Nrf2组的活性氧水平显著高于LPS组、Control组,并且差异具有统计学意义(P0.05)。结论LPS激活氧化因子及炎症因子诱导宫内感染致新生鼠肺氧化应激性损伤从而引起BPD,Nrf2通过调控抗氧化因子对大鼠ACEⅡ发挥保护作用。