联合microRNA测序及体外实验探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制
Combined With MicroRNA Sequencing and In Vitro Experiments to Explore the Mechanism of MiR-15b-ediated PINK mediated PINK1/Parkin Mitophagy Pathway in the process of Chronic Heart Failure作者机构：佛山市中医院广东佛山528051
出 版 物：《中医康复》 (Traditional Chinese Medicine Rehabilitation)
年 卷 期：2024年第1卷第4期
页 面：11-17页
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学]
基 金：佛山市科技局医学类科技攻关项目(NO.2220001005032)
主 题：心力衰竭 线粒体自噬 miR-15b PINK1/Parkin信号通道
摘 要：目的:探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制,寻找防治心衰的新靶点。方法:通过高通量测序检测心衰患者与健康志愿者体内表达差异microRNA;体外实验培养HL-1心肌细胞,通过AngII诱导心肌细胞损伤模型,采用细胞转染技术过表达和抑制miR-15b水平,利用qRT-PCR检测miR-15b转染效能及在各组的表达水平;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与PINK1靶标关系;运用WesternBlot检测自噬蛋白Beclin-1、LC3B及线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin等表达水平;运用免疫荧光法检测心肌细胞PINK1、Parkin蛋白表达情况。结果:心衰患者和健康志愿者外周血中microRNA表达存在明显差异,其中心衰患者外周血清miR-15b水平上调明显[log2(Fold_change)1;P0.01],通过对miR-15b靶基因进行预测,发现PINK1是其靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定miR-15b与PINK1之间的靶向关系。细胞实验中,与空白组相比,模型组miR-15b的表达增多(P0.05),自噬蛋白LC3B、Beclin-1水平下降(P0.01),线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin水平下降(P0.01);与模型组相比,转染miR-15b mimics后上述趋势显著增强(P0.05);转染miR-15b inhibitor后可逆转上述趋势(P0.01)。结论:miR-15b可通过介导PINK1/Parkin线粒体自噬水平信号通道调控自噬水平,可能成为心力衰竭潜在的治疗靶点。
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