石蒜碱对缺氧条件下心肌细胞损伤和心肌成纤维细胞活化与胶原合成的影响及其生物学机制

作     者：韩明磊 刘振 侯永兰 崔佳佳 金卫东 

作者机构：新乡市中心医院新乡医学院第四临床学院心血管内科河南新乡453000 

出 版 物：《中国老年学杂志》 (Chinese Journal of Gerontology)

年 卷 期：2024年第44卷第5期

页      面：1165-1172页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：河南省医学科技攻关计划联合共建立项项目(LHGJ20200937) 

主　　题：石蒜碱 心肌细胞 心肌成纤维细胞 含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP)3炎症小体 

摘      要：目的 在体外探讨石蒜碱(LYC)对缺氧条件下心肌细胞损伤和心肌成纤维细胞活化与胶原合成的影响及其生物学机制。方法 分离SD乳鼠心肌细胞与心肌成纤维细胞;使用低氧条件诱导心肌细胞损伤,并将细胞分为4组:对照(Ctl)组、缺氧(Hyp)组、缺氧与LYC联合处理(Hyp+LYC)组、缺氧与含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP)3炎症小体抑制剂MCC950联合处理(Hyp+MCC950)组;Western印迹检测不同缺氧时间(1、2、4、8 h)对心肌细胞中NLRP3蛋白表达的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述4组心肌细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α与心肌细胞损伤标记分子乳酸脱氢酶(LDH)的含量;TUNEL染色检测各组心肌细胞的凋亡水平;Western印迹检测各组心肌细胞中NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)-1、cleaved IL-1β和cleaved IL-18与cleaved GSDMD蛋白表达水平;应用血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化,并将细胞同样分为4组:对照(Control)组,AngⅡ处理(AngⅡ)组,联合使用AngⅡ与LYC处理(AngⅡ+LYC)组,联合使用AngⅡ与MCC950处理(AngⅡ+MCC950)组;5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)染色与Transwell实验观察各组心肌成纤维细胞的增殖活力与迁移能力;细胞免疫荧光(IHC)染色检测各组心肌成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达丰度;Western印迹检测心肌成纤维细胞中纤维化标志分子Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、α-SMA和转化生长因子(TGF)-β的蛋白表达水平。结果 低氧处理可显著刺激心肌细胞中NLRP3蛋白表达(P0.05);与Control组相比,AngⅡ组、AngⅡ+LYC与AngⅡ+MCC950组心肌成纤维细胞的EDU阳性率、迁移能力和细胞中α-SMA蛋白表达丰度及ColⅠ、ColⅢ、α-SMA和TGF-β蛋白表达水平均显著增加(P0.05)。结论 LYC可能通过降低NLRP3炎症小体的激活在体外改善缺氧诱导的心肌损伤与炎症反应,并抑制心肌成纤维细胞的活化与促纤维介质的释放。