人tau蛋白N端结构域特异性单克隆抗体筛选及在血液检测中的应用

作     者：闫子迪 张译文 姜家龙 刘振武 王荷 张莹 何金生 洪涛 YAN Zidi;ZHANG Yiwen;JIANG Jialong;LIU Zhenwu;WANG He;ZHANG Ying;HE Jinsheng;HONG Tao

作者机构：北京交通大学生命科学与生物工程研究院北京100044 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2024年第40卷第5期

页      面：1571-1583页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100203[医学-老年医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81271417) 山东省重点研发计划(2019JZZY011011) 北京交通大学人才基金(2024XKRC032) 中山市重大科技专项(2020A1003) 

主　　题：阿尔茨海默病生物标志物 微管相关蛋白tau 双抗体夹心ELISA 单克隆抗体 

摘      要：微管相关蛋白tau抗体在阿尔茨海默病(Alzheimer s disease, AD)及其他tau蛋白病的基础和临床研究中发挥重要作用。采用重组人tau441作为免疫原,通过细胞融合及有限稀释法筛选并获得分泌抗人tau蛋白N端结构域(tau N-terminal domain,NTD-tau)单克隆抗体杂交瘤细胞株,通过制备小鼠腹水及亲和层析获得纯化的单克隆抗体;分别采用间接ELISA检测其灵敏度,蛋白质印迹检测其特异性;建立并优化人tau蛋白双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,杂交瘤细胞克隆阳性率为83.6%,建立分泌ZD8F7单克隆抗体的稳定细胞株,细胞上清中抗体效价为1:16000;腹水中抗体效价高于1:256 000;纯化后单克隆抗体效价高于1:128 000;表位分析显示,ZD8F7单克隆抗体识别tau21-37位氨基酸,位于N端结构域;蛋白质印迹分析显示,ZD8F7单克隆抗体识别50-70 kDa重组人tau蛋白及转基因AD模型小鼠(APP/PS1/tau)脑组织中50 kDa的人tau蛋白;以ZD8F7单克隆抗体作为捕获抗体建立的人tau蛋白定量检测方法,线性范围在7.8-500.0 pg/mL,可以识别AD转基因小鼠脑组织以及血浆中的人tau蛋白,而不识别小鼠tau蛋白。综上,本研究制备的人NTD-tau特异性单抗和双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高,为神经退行性疾病中tau蛋白检测提供了有力工具。