灰葡萄孢寄生菌Clpse01的杀线活性研究

作     者：徐勇 彭子嘉 徐正梅 邵雅坤 蓝燕 徐清华 余仲东 XU Yong;PENG Zijia;XU Zhengmei;SHAO Yakun;LAN Yan;XU Qinghua;YU Zhongdong

作者机构：西北农林科技大学林学院杨凌712100 修水县农业局九江332400 先正达(中国)投资有限公司上海200120 

出 版 物：《中国生物防治学报》 (Chinese Journal of Biological Control)

年 卷 期：2024年第40卷第1期

页      面：186-195页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 

基　　金：国家重点研发项目(2023YFC2604803) 

主　　题：松材线虫 灰葡萄孢菌 假卡鲁卡枝惠霉 寄生真菌 生防真菌 

摘      要：在用灰葡萄孢菌Botrytis cinerea培养松材线虫的过程中,发掘了一株具有杀线活性的灰葡萄孢寄生菌Clpse01。本文在光学显微镜下对菌株Clpse01的形态和其对灰葡萄孢菌的生长影响进行了观察;采用ITS4/ITS5、LR5/LR0R、Bt2a/Bt2b和EF1-688F/EF1-1251R引物进行了分子生物学鉴定;同时测试了菌株Clpse01对松材线虫的杀线活性及对松材线虫卵孵化能力和繁殖能力的影响;最后测试了菌株Clpse01的胞外蛋白浓度,胞外β-葡萄糖苷酶活性和胞外几丁质酶活性。根据形态学和分子生物学结果,将菌株Clpse01鉴定为假卡鲁卡枝惠霉Clonostachyspseudochroleuca。菌株Clpse01可以缠绕、侵入灰葡萄孢菌的菌丝以获得营养来源,使灰葡萄孢菌的菌丝生长受到抑制。将2000条松材线虫接种到长满菌株Clpse01的培养基上,8 d后仅分离出6条/皿活线虫,而对照灰葡萄孢菌培养基上分离的线虫数为33066条/皿活线虫;菌株Clpse01发酵液处理松材线虫48 h后的校正死亡率为88%,浓度为1×108孢子/mL的孢子悬液处理松材线虫24 h后的校正死亡率为88.33%;菌株Clpse01 2×稀释发酵液24 h对卵的孵化抑制率为100%。发酵培养6 h后,菌株Clpse01胞外蛋白浓度为1782.917μg/mL,胞外β-葡萄糖苷酶为9.99 U/mL,胞外几丁质酶含量为0.8792U/mL,并随发酵时间推移而升高。菌株Clpse01通过寄生松材线虫的食物来源灰葡萄孢菌和影响松材线虫的繁殖、存活和卵的孵化起作用,胞外β-葡萄糖苷酶、几丁质酶是毒杀松材线虫的两个重要生理因子。