717解毒合剂通过NETs-CYR61/CCN1信号通路对蝮蛇咬伤大鼠局部组织损伤修复作用

作     者：董德刚 杨悦 郑向龙 毛文丽 宋梅 严张仁 王万春 DONG Degang;YANG yue;ZHENG Xianglong;MAO Wenli;SONG Mei;YAN Zhangren;WANG Wanchun

作者机构：江西中医药大学生命科学学院南昌330004 江西中医药大学附属医院中医外科南昌330006 南昌医学院公共学科教学部南昌330004 不详 

出 版 物：《中国药学杂志》 (Chinese Pharmaceutical Journal)

年 卷 期：2024年第59卷第2期

页      面：151-160页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金地区项目资助(81360288、81960874、82260937) 江西省自然科学基金重点项目资助(20202ACB206010) 江西中医药大学首批科技创新团队资助项目资助(CXTD22009) 江西中医药大学中西医结合一级学科资助(江西省双一流学科,zxyylxk20220103) 江西省教育厅科技一般项目资助(GJJ201236) 

主　　题：717解毒合剂 蝮蛇咬伤 中性粒细胞胞外陷阱 细胞外基质 富含半胱氨酸蛋白61 局部组织 

摘      要：目的探究717解毒合剂对蝮蛇咬伤大鼠局部组织中性粒细胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps,NETs)水平,以及对富含半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)表达的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、蝮蛇咬伤组及抗蝮蛇毒血清组及717解毒合剂高、低剂量组。收集血清、大腿腓肠肌,采用苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin staining,HE)和马松(Masson)染色观察各组腓肠肌病理学变化,透射电镜观察腓肠肌超微结构,原位末端凋亡(TUNEL)法检测各组大鼠腓肠肌细胞凋亡情况,PicoGreen荧光检测各组血清游离DNA(cf-DNA)水平,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组血清与腓肠肌中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达水平,免疫组化检测腓肠肌中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的改变,免疫荧光法检测各组大鼠腓肠肌瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)水平,Western blot与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测腓肠肌组织CYR61/CCN1蛋白及其mRNA表达情况。结果与正常组比较,模型组出现显著的炎性浸润与出血反应,且胶原纤维化程度均升高;超微结构显示模型组大鼠腓肠肌细胞结构损伤严重,肌节呈非对称性分布,肌原纤维丝断裂;并分布有大量凋亡细胞,血清cf-DNA、MPO含量显著上升(P0.01),腓肠肌MPO及CitH3蛋白表达均有升高(P0.05或P0.01),腓肠肌CYR61/CCN1蛋白及其mRNA表达均有上调;717解毒合剂各给药组均能显著改善大鼠局部炎性反应及出血症状,降低胶原纤维化程度,有效抑制蝮蛇咬伤大鼠腓肠肌细胞凋亡率,减少血清cf-DNA、MPO含量(P0.05或P0.01),717解毒合剂高剂量组抑制了腓肠肌NE、MPO的表达,717解毒合剂各给药组均能降低腓肠肌CitH3的表达(P0.05或P0.01),抑制了CYR61/CCN1蛋白及其mRNA高表达。结论蝮蛇毒诱导局部组织中性粒细胞NETs形成,CYR61/CCN1地过表达,717解毒合剂改善了大鼠腓肠肌超微结构,抑制了细胞凋亡,并可能通过调控NETs-CYR61/CCN1信号通路改善蛇伤症状,NETs信号分子及CYR61/CCN1有望成为蝮蛇毒致局部组织损伤防治的新靶点。