体外催化花生四烯酸生产前列腺素F_(2α)

作     者：范潇 何国威 黄薇 童建华 卢向阳 田云 刘虎虎 FAN Xiao;HE Guowei;HUANG Wei;TONG Jianhua;LU Xiangyang;TIAN Yun;LIU Huhu

作者机构：湖南农业大学生物科学技术学院长沙410128 

出 版 物：《中国油脂》 (China Oils and Fats)

年 卷 期：2024年第49卷第1期

页      面：114-119页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 081702[工学-化学工艺] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(21808052) 湖南农业大学“双一流”建设项目(SYL201802002) 长沙市杰出创新青年培养计划(kq2106049) 

主　　题：花生四烯酸 前列腺素F_(2α) 体外催化 前列腺素H合成酶 

摘      要：前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))具有广泛的生理活性,是一种重要的脂质介质。为了实现PGF_(2α)的绿色生物合成,构建了pET30a-TbPGFS、pET30a-MmPGHS、pET30a-GvPGHS载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达,同时对异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达条件进行了优化以提高重组蛋白在大肠杆菌中的表达量。另外,以最佳诱导表达条件下得到的重组蛋白为催化剂,催化花生四烯酸合成PGF_(2α)。结果表明:MmPGHS蛋白在大肠杆菌中没有表达;GvPGHS蛋白的最佳诱导表达条件为诱导剂IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导温度30℃、诱导时间2 h,TbPGFS蛋白的最佳诱导表达条件为诱导剂IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导温度30℃、诱导时间6 h;在最佳诱导表达条件下,由GvPGHS和TbPGFS的粗酶液构成的双酶催化未能检测到产物PGF_(2α),而在酶偶联化学催化时,GvPGHS能将花生四烯酸转化为PGH_(2),PGH_(2)被SnCl_(2)进一步还原为PGF_(2α)。综上,通过体外酶促反应结合化学法可高效转化花生四烯酸生产PGF_(2α)。