牛布氏杆菌病和分枝杆菌病二联表位疫苗的构建及其免疫效果评价

作     者：卢宝平 扈立伟 任君 杜荣起 顾天越 包利霞 刘青 朱凡杰 张东超 金天明 LU Baoping;HU Liwei;REN Jun;DU Rongqi;GU Tianyue;BAO Lixia;LIU Qing;ZHU Fanjie;ZHANG Dongchao;JIN Tianming

作者机构：天津农学院/天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300392 天津农学院动物科学与动物医学学院/天津市畜禽病原检测与基因工程疫苗工程技术中心天津300392 天津市农业科学院/天津市畜禽分子育种与生物技术重点实验室天津300192 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第56卷第2期

页      面：69-75页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：天津市自然科学基金重点项目(12JCZDJC22100) 国家自然科学基金青年基金项目(32202760) 天津市农委农业科技示范推广项目(批准文号:201202110) 天津市兽医生物技术优秀科研创新团队项目(TD12-5019) 天津市高等学校科技发展基金项目(20060720) 天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室开放基金课题资助项目(2020zdkf02) 

主　　题：牛布氏杆菌病 牛分枝杆菌病 表位疫苗 Omp25 Ag85A 

摘      要：为研发一种更安全、有效的防控牛布氏杆菌病和分枝杆菌病的疫苗,运用在线软件ABCPerd和IEBD对牛布氏杆菌外膜蛋白(Omp25)和牛分枝杆菌抗原85A(Ag85A)的B、T细胞表位进行预测分析,设计新的表位基因肽段NewⅠ和NewⅡ,并通过SOPMA和VaxiJen在线软件对NewⅠ和NewⅡ的二级结构与抗原性进行分析。将NewⅠ、Omp25、NewⅡ和Ag85A基因序列依次用自剪切肽T2A、P2A、E2A进行连接,获得串联基因并命名为COE,将COE基因构建至真核表达载体GV658,获得重组质粒GV658-COE;将上述重组质粒转染至HEK293细胞,利用细胞计数(CCK-8)试验评估GV658-COE对细胞的安全性,通过免疫印迹分析目的蛋白的表达情况;将重组质粒以400μg/只的剂量免疫大鼠,检测在第3次免疫后的血清抗体及大鼠脾淋巴细胞中的T细胞亚群占比情况。结果显示:NewⅠ和NewⅡ序列二级结构较稳定,抗原性良好;重组质粒经PCR扩增获得3231 bp大小的目的条带,与预计相符;重组质粒对HEK293细胞无毒性作用;重组质粒在HEK393细胞中可表达出目的蛋白,分别在22.3、17.3、23.9和35.6 kDa处有目的蛋白NewⅠ、Omp25、NewⅡ和Ag85A的表达。三免后,重组质粒免疫大鼠产生的IgG水平均高于空载质粒组和PBS组;与PBS组相比,重组质粒免疫大鼠脾脏中CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞百分比均升高。研究表明,重组质粒GV658-COE能有效激发大鼠的体液免疫和细胞免疫反应,可成为预防牛布氏杆菌病和分枝杆菌病的候选疫苗。