腹腔渗出细胞辅助原代培养成年大鼠视网膜Muller细胞

作     者：毛俊峰 刘双珍 秦文娟 李凤云 谭浅 吴小影 MAO Jun-feng;LIU Shuang-zhen;QIN Wen-juan

作者机构：中南大学湘雅医院眼科长沙410008 

出 版 物：《中华眼底病杂志》 (Chinese Journal of Ocular Fundus Diseases)

年 卷 期：2009年第25卷第3期

页      面：206-209页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年基金(30600694) 

主　　题：巨噬细胞 细胞培养技术 流式细胞术 Muller细胞 

摘      要：目的观察以腹腔渗出细胞为饲养细胞对原代培养的成年大鼠视网膜Muller细胞生长状态的影响。方法制备大鼠腹腔渗出细胞，CD68免疫组织化学染色鉴定巨噬细胞，墨汁吞噬实验检测吞噬活性。酶消化法原代培养成年大鼠视网膜Muller细胞，神经胶质酸性蛋白（GFAP）和波形蛋白免疫组织化学染色鉴定。饲养细胞加入Muller细胞进行共培养后，流式细胞术分析Muller细胞的生长周期，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口翻译法（TUNEL）染色检测凋亡情况。结果大鼠腹腔渗出细胞中巨噬细胞占95％以上，对墨汁颗粒有良好的吞噬能力。原代培养的Muller细胞贴壁生长，胞体较大、扁平，第3代细胞生长减慢。加入饲养细胞后，Muller细胞生长增生加快，S期和G2／M期细胞增多（S期，t=4．172，P〈0．001；G2／M期，t=3．562，P〈0．01），第1代细胞生长时间由25-30d缩短至18-22d，第2代由10-15d缩短至7-10d；Muller细胞凋亡减少（t=3．804，P〈0．01）。结论以腹腔渗出细胞为饲养细胞能促进Muller细胞的生长增生，抑制其凋亡，加快Muller细胞的培养速度，是原代培养成年大鼠视网膜Muller细胞的一种有效方法。