款冬酮对过敏性鼻炎模型小鼠肥大细胞活性的抑制作用

作     者：刘水霞 陈菁华 朱旭利 王丹 高旭栋 赵玉祥 李安 LIU Shuixia;CHEN Jinghua;ZHU Xuli;WANG Dan;GAO Xudong;ZHAO Yuxiang;LI An

作者机构：西北妇女儿童医院耳鼻咽喉科西安710061 陕西省人民医院耳鼻咽喉头颈外科 

出 版 物：《山西医科大学学报》 (Journal of Shanxi Medical University)

年 卷 期：2023年第54卷第11期

页      面：1488-1495页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100213[医学-耳鼻咽喉科学] 10[医学] 

基　　金：陕西省重点研发计划项目(2020SF-198)。 

主　　题：款冬酮 过敏性鼻炎 肥大细胞 免疫 PI3K/PKB信号通路 

摘      要：目的探究款冬酮(tussilagone,TUS)对过敏性鼻炎模型(allergic rhinitis,AR)小鼠肥大细胞的抑制作用及其分子机制。方法将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、TUS组和Ly294002组,每组10只。AR小鼠模型采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)联合鼻腔滴注OVA方法构建。造模完成后第1~7天,TUS组小鼠按照5 ml/kg的剂量每天腹腔注射8×10-2 mol/L款冬酮药剂;Ly294002组小鼠每天腹腔注射6.0 mg/kg的PI3K/AKT信号通路抑制剂Ly294002溶液。采用HE染色检测小鼠鼻黏膜组织病理情况,Giemsa染色检测鼻黏膜组织嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润;采用ELISA法检测致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4、IL-5和IFN-γ水平;流式细胞术检测小鼠脾脏组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)T细胞水平。Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平。将RBL-2H3细胞分为对照组、模型组、款冬酮组(C-TUS组)和Ly294002组(C-Ly294002组)。采用100 ng/ml的DNP-IgE处理12 h致敏细胞后,C-TUS组细胞加入1μl浓度为8×10^(-2) mol/L的款冬酮处理2 h,C-Ly294002组细胞加入10μl浓度为25 mol/L的Ly294002溶液处理2 h。采用ELISA法检测β-己糖氨酸酶和组胺水平,采用Fura-2/AM钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度,Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠鼻黏膜组织出现了大量炎性细胞浸润,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均增加;TUS组和Ly294002组小鼠鼻黏膜组织炎性浸润较模型组显著改善,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均减少。与对照组比较,模型组小鼠血清中致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均升高(P0.05)。与对照组比较,模型组RBL-2H3细胞中β-己糖氨酸酶、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均升高(P0.05)。结论款冬酮通过抑制肥大细胞的活化和维持细胞免疫稳态,对过敏性鼻炎起到缓解作用,该机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路激活有关。