石胆酸通过上调miR-21表达降低核受体PPARαmRNA的稳定性

作     者：庞碧滢 黄娜娜 黄晓霞 李馨 熊文婷 孔波 姚焱 PANG Biying;HUANG Nana;HUANG Xiaoxia;LI Xin;XIONG Wenting;KONG Bo;YAO Yan

作者机构：广州大学生命科学学院广东广州510000 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2023年第43卷第12期

页      面：2086-2094页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81973376) 广州大学研究生“基础创新”项目(2021GDJC-M24)。 

主　　题：石胆酸 PPARα miR-21 mRNA稳定性 

摘      要：目的探讨石胆酸在转录后水平对PPARαmRNA稳定性的调控。方法构建PPARα3 UTR荧光素酶报告基因载体并转染HepG2细胞,比较两种浓度石胆酸处理后荧光素酶活性的变化。结合生物信息学预测,确定石胆酸诱导下差异表达的miRNAs及其在3 UTR上的潜在结合位点,对结合位点进行突变(Mut1、Mut2和Mut1+Mut2),比较石胆酸处理后Mut1、Mut2和Mut1+Mut2荧光素酶活性的变化。利用Westernblot和RT-qPCR检测两种浓度石胆酸处理下信号通路的激活及其下游转录因子基因表达水平,比较不转染对照组和瞬时转染过表达转录因子的PPARα蛋白表达,确定参与石胆酸调控PPARαmRNA稳定性的信号通路和转录因子。结果与对照组相比,100μmol/L石胆酸诱导3 UTR1和3 UTR2片段荧光素酶活力均显著下降超过50%(P0.01)。miRNAPCRarray筛选发现石胆酸诱导miR-21和miR-22差异表达,100μmol/L石胆酸诱导miR-21表达上调2.35倍(P0.05)。定点突变3 UTR1中两个预测的miR-21位点,构建了Mut1、Mut2和Mut1+Mut2报告基因载体。相对于对照组,石胆酸下调3 UTR1荧光素酶活性51%,而Mut1、Mut2和Mut1+Mut2分别被下调37%、39%、13%。Westernblot显示石胆酸磷酸化ERK1/2,激活ERK1/2信号通路;100μmol/L石胆酸上调转录因子EGR1基因表达水平5.83倍(P0.01);瞬时转染过表达EGR1显著下调PPARα蛋白水平(P0.05)。结论石胆酸通过激活肝细胞中ERK1/2信号通路,诱导早期生长应答因子EGR1和miR-21的表达上调,使miR-21作用于3 UTR调控区,降低PPARαmRNA的稳定性,从而减少PPARα基因和蛋白表达水平。