微小RNA-129-5p通过成纤维细胞生长因子2调节老年性骨质疏松性骨折中骨分化和骨稳态的功能研究

作     者：尚文韬 贾智超 周玉哲 宋鹏 肖鹏 Shang Wentao;Jia Zhichao;Zhou Yuzhe;Song Peng;Xiao Peng

作者机构：郑州大学第一附属医院骨科郑州450052 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2023年第40卷第11期

页      面：2196-2199页

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：河南省教育厅(232102310253)。 

主　　题：老年性骨质疏松性骨折 破骨细胞分化 微小RNA-129-5p 成纤维细胞生长因子2 核因子-κB受体活化因子配体 

摘      要：目的:探讨破骨细胞分化过程中微小RNA(miR)-129-5p的失调以及miR-129-5p在破骨细胞分化中的确切作用机制。方法:首先建立核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导鼠源单核巨噬细胞(RAW264.7)分化的破骨细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-129-5p在破骨细胞分化前后的表达差异。然后用miR-129-5p模拟物处理RANKL诱导的RAW264.7细胞,验证miR-129-5p对破骨细胞分化的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验用于检测破骨细胞的增殖活性,抗酒石酸酸性磷酸酶染色确定破骨细胞数目,蛋白质印迹法检测破骨相关标志物的蛋白表达。最后,通过RT-qPCR或蛋白质印迹法分析miR-129-5p对成纤维细胞生长因子2(FGF2)表达的影响。组间统计学差异采用T-Test法检验。结果:miR-129-5p在RANKL组的表达水平低于对照组(0.405±0.007比0.984±0.031,t=24.070,P0.01)。在功能上,上调miR-129-5p可以抑制破骨细胞的分化,CCK-8实验结果显示,miR-129-5p处理组的破骨细胞活力低于阴性对照组(1.096±0.027比0.549±0.006,t=33.670,P0.001)。机制上,miR-129-5p对破骨细胞分化的抑制作用,可能与负调节FGF2表达有关。RT-qPCR实验结果显示,miR-129-5p处理组破骨细胞中FGF2 mRNA表达水平明显低于对照组(1.001±0.026比0.151±0.004,t=48.001,P0.01)。此外,功能挽救实验结果表明过表达FGF2可以抵消miR-129-5p上调对破骨细胞分化的抑制作用。RT-qPCR实验结果显示,miR-129-5p mimic+OE-FGF2组破骨细胞中FGF2的水平高于miR-129-5p mimic+OE-NC组(0.973±0.059比5.108±0.018,t=86.059,P0.001),差异均有统计学意义。结论:miR-129-5p通过负调节FGF2表达,显著抑制了破骨细胞分化。