日勾维多细菌源菌双重PCR快速检测方法建立

作     者：刘丰 邓源昌 应国红 王晓炜 Feng Liu;Yuanchang Deng;Guohong Ying;Xiaowei Wang

作者机构：深圳市药品检验研究院/国家药品监督管理局化妆品监测评价重点实验室广东深圳518057 广东医科大学广东东莞523808 

出 版 物：《日用化学工业（中英文）》 (China Surfactant Detergent & Cosmetics)

年 卷 期：2024年第54卷第1期

页      面：45-50页

学科分类：081702[工学-化学工艺] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：广东省药品监督管理局2022年科技创新项目(2022TDB67) 广东省药品监督管理局2023年科技创新项目(2023TDB53) 深圳市药品检验研究院(深圳市医疗器械检测中心)2023年度十大科研课题(YNKT20230205) 

主　　题：化妆品 日勾维多细菌源菌 双重PCR 快速检测 

摘      要：建立日勾维多细菌源菌快速检测方法,快速有效地检出样品中的日勾维多细菌源菌。利用日勾维多细菌源菌的看家基因gyrB和ropB,设计2对特异性的扩增引物,以培养液作为DNA扩增模板,建立双重PCR快速检测方法,并通过优化扩增反应的退火温度,提高双重PCR的特异性;利用引物gyrB-F/gyrB-R和ropB-F/ropB-R(insert)扩增4株日勾维多细菌源菌,可得到2条特异性的目标DNA条带,但非目标菌会出现非特异性DNA条带。优化后的退火温度为65℃,以4株日勾维多细菌源菌为DNA模板时,可扩增出特异性的目标DNA条带;以大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌和洋葱伯克霍尔德菌为DNA模板时,均检测不到DNA条带。当样品中的日勾维多细菌源菌达到4.4 CFU/mL时,双重PCR即可高灵敏检出样品中的日勾维多细菌源菌。可用双重PCR方法快速检出沐浴露、洗发水等淋洗类化妆品中的日勾维多细菌源菌。