猪流行性腹泻病毒解旋酶Nsp13表达纯化及其RNA解旋活性鉴定

作     者：沈熹涓 姬晶晶 金慧琴 李宇哲 刘斐 单衍可 SHEN Xijuan;JI Jingjing;JIN Huiqin;LI Yuzhe;LIU Fei;SHAN Yanke

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第56卷第1期

页      面：33-38页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(32000028) 中国博士后基金面上基金项目(2020M681649) 江苏省博士后科研资助项目(2020Z120) 

主　　题：PEDV Nsp13 可溶性表达 蛋白纯化 RNA解旋活性 

摘      要：旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中,利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱导16 h,收集诱导后的菌体,超声破碎并收集其上清液,通过镍亲和层析技术获得纯化后的PEDV Nsp13;设计RNA底物,并建立体外解旋反应体系,验证蛋白的RNA解旋活性,并在相同时间内探究不同温度条件下PEDV Nsp13蛋白对RNA的解旋情况,进一步验证其活性。结果表明,在大肠杆菌系统中可溶性表达了PEDV Nsp13蛋白,纯化后蛋白浓度可达0.9 mg/mL;通过体外解旋试验,验证了PEDV Nsp13蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,并发现PEDV Nsp13蛋白的RNA解旋酶活性在一定范围内随解旋温度的升高而提高。本研究结果为进一步深入研究PEDV Nsp13的RNA解旋作用机制奠定了基础。