H_(2)O_(2)对人胚肾293细胞钠钙交换体内向电流的作用及机制

作     者：项国剑 柯永鑫 陈茜 王庆峰 曾琳雯 李泱 张建成 XIANG Guojian;KE Yongxin;CHEN Qian;WANG Qingfeng;ZENG Linwen;LI Yang;ZHANG Jiancheng

作者机构：福建省立医院心血管内科福州福建350001 福建医科大学省立临床医学院心血管内科 福州市长乐区医院心血管内科 福建省立医院重症医学科 福建省立医院心电诊断科 解放军总医院老年心血管病研究所 

出 版 物：《中华高血压杂志》 (Chinese Journal of Hypertension)

年 卷 期：2023年第31卷第11期

页      面：1079-1085页

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82070341)。 

主　　题：钠钙交换体 钠钙交换电流 H_(2)O_(2) 全细胞膜片钳技术 

摘      要：目的 探讨H_(2)O_(2)对钠钙交换体(NCX)内向电流的调控及可能的机制。方法 利用绿色荧光蛋白标记表达系统将NCX1.1质粒转染人胚肾293细胞(HEK293),全细胞膜片钳技术记录NCX内向电流,观察H_(2)O_(2)对NCX1.1内向电流和I-V曲线的作用及浓度依赖性作用。选取120个转染阳性的HEK293细胞,随机均分成对照组、H_(2)O_(2)处理组、Gi蛋白抑制剂百日咳毒素(PTX)及H_(2)O_(2)处理组,蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89及H_(2)O_(2)处理组,记录对比处理前后NCX内向电流的变化。Western-blot法检测HEK293组、H_(2)O_(2)组、PTX+H_(2)O_(2)组、H89+H_(2)O_(2)组处理24 h后细胞NCX1.1蛋白水平的变化。结果 H_(2)O_(2)可使NCX1.1内向电流增加,使其电流密度从(-6.22±0.53)pA/pF增加至(-12.92±1.12)pA/pF(n=60,t=2.54,P0.01),在细胞外灌流不同浓度的H_(2)O_(2),NCX1.1内向电流增加呈浓度依赖性特征。在倒斜坡刺激模式中,H_(2)O_(2)对内向电流的作用存在电压依赖性。Gi蛋白选择性抑制剂PTX可以逆转H_(2)O_(2)的增加效应[H_(2)O_(2):(-12.92±1.12)比H_(2)O_(2)+PTX:(-6.76±0.60)pA/pF,t=3.61,n=60,P0.001]。PKA抑制剂H89同样可以逆转H_(2)O_(2)的增加效应[H_(2)O_(2):(-12.92±1.12)比H_(2)O_(2)+H89:(-7.22±1.60)pA/pF,n=60,t=4.17,P0.005]。应用H_(2)O_(2)与HEK293细胞培养24 h后,观察到细胞NCX1.1蛋白表达增加,而PTX及H89可以逆转H_(2)O_(2)对NCX1.1蛋白的增加效应。结论 H_(2)O_(2)刺激可增加NCX1.1内向电流,Gi-环磷酸腺苷(cAMP)-PKA信号通路参与该过程的调节。