CRMP1 基因慢病毒干扰质粒的构建及其对 SH-SY5Y中NLRP3炎症小体蛋白表达的影响

作     者：王松豪 秦坤 韩雨 张微微 徐绍业 邵晓云 

作者机构：桂林医学院人体解剖学教研室 桂林医学院科学实验中心 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2023年

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：广西自然科学基金(2021GXNSFAA075004 2022GXNSFAA035456 2017GXNSFAA198003) 桂林医学院硕士研究生科研项目（GYYK2023009） 

主　　题：坍塌反应调节蛋白1 慢病毒干扰 人神经母细胞瘤细胞 NLRP3炎症小体 

摘      要：目的：构建靶向坍塌反应调节蛋白1（CRMP1）基因慢病毒干扰质粒，建立稳定敲减CRMP1的人母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）稳转细胞系，探讨其对NLRP3炎症小体蛋白表达的影响。方法：以h-CRMP1 mRNA为靶序列设计合成shRNA双链，将其克隆至PLKO.1载体，构建CRMP1重组干扰质粒。将重组正确的shCRMP1质粒转染HEK-293T细胞进行慢病毒包装，将获得的慢病毒上清液浓缩后感染SH-SY5Y细胞，Western blot检测SH-SY5Y细胞内CRMP1的干扰效果以及对NLRP3炎症小体各组分蛋白表达的影响。结果：测序结果显示，shCRMP1慢病毒干扰质粒构建成功；转染HEK-293T细胞包装慢病毒后，细胞内CRMP1蛋白表达下降；慢病毒浓缩液感染SH-SY5Y细胞经嘌呤霉素筛选，Western blot结果发现shCRMP1慢病毒能显著下调SH-SY5Y细胞中CRMP1的蛋白表达量。同时，在稳定敲减CRMP1的SH-SY5Y细胞系中发现，在MPP+诱导作用下，抑制CRMP1表达可有效抑制NLRP3炎症小体活化。结论：成功构建pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒，且干扰CRMP1后可抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞中NLRP3炎症小体的活化，为进一步研究CRMP1在帕金森病等神经退行性疾病的发生机制奠定基础。