TRV介导的溪荪VIGS转化体系的构建与鉴定

作     者：刘桂伶 徐诺 史恭发 王玲 LIU Guiling;XU Nuo;SHI Gongfa;WANG Ling

作者机构：东北林业大学园林学院哈尔滨150040 

出 版 物：《植物研究》 (Bulletin of Botanical Research)

年 卷 期：2024年第44卷第1期

页      面：132-138页

学科分类：0710[理学-生物学] 071001[理学-植物学] 07[理学] 

基　　金：国家科技基础资源调查专项(2019FY100500) 中央高校基本科研业务费专项资金(2572021AW01) 黑龙江省自然基金项目(LH2020C044) 

主　　题：溪荪 IsPDS基因 VIGS体系 

摘      要：病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术为缺乏稳定遗传转化体系的植物进行基因功能分析提供了可能,为解决缺少稳定遗传转化体系的植物进行基因功能验证的需求,以单子叶植物溪荪(Iris sanguinea)为材料,克隆IsPDS基因的特异性片段并构建其VIGS重组载体pTRV2-IsPDS,通过注射法侵染溪荪叶片,结果显示:pTRV1和pTRV2-IsPDS的菌液OD_(600)调至1.8~2.0后重悬,重悬液OD600调至0.8~1.0,通过注射器叶脉注射方式侵染溪荪叶片效果最佳。在室外温度为15~20℃的下午6~8时进行,用1 mL注射器针头扎伤溪荪叶片外表皮,沿着平行脉缓慢注射重悬液1mL至溪荪叶片维管束中,14 d左右会出现明显的白化表型。在出现表型变化的植株和空载组中均检测到TRV1和TRV2的病毒载体,白化植株的IsPDS表达量显著低于对照组。侵染液配制中通过提高携带病毒载体的农杆菌的浓度提高侵染效率,且接种后无需遮光。