HIF-1α纳米抗体的制备及其抑制黑素瘤生长的作用

作     者：李佳敏 贾琼 秦蓉芬 迟志端 王富明 范瑞文 LI Jiamin;JIA Qiong;QIN Rongfen;CHI Zhiduan;WANG Fuming;FAN Ruiwen

作者机构：山西农业大学动物医学学院山西太谷030801 晋中市庄子乡综合便民服务中心山西晋中030600 

出 版 物：《山西农业科学》 (Journal of Shanxi Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第51卷第12期

页      面：1435-1441页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：“三晋学者”支持计划专项经费。 

主　　题：HIF-1α 纳米抗体 B16细胞 Western Blot法 CCK-8法 细胞增殖 细胞迁移 

摘      要：缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)参与低氧微环境相关疾病的发生等过程,具有控制肿瘤生长和发展的功能。黑色素瘤是一种发生于人和动物恶性程度较高的肿瘤。为探明HIF-1α纳米抗体对黑色素瘤的影响,研究利用前期保存的羊驼源黑色素瘤细胞噬菌体文库筛选HIF-1α纳米抗体,经原核表达与纯化后,通过Western Blot和免疫组织化学验证HIF-1α纳米抗体与抗原的结合性;分别通过CCK-8法、划痕试验以及Western Blot法检测其对B16黑素瘤细胞的增殖和迁移能力及其相关分子表达的影响。结果表明,经表达和纯化获得的HIF-1α纳米抗体分子质量约为16 ku,没有跨膜结构,具有亲水性。通过Western Blot和免疫组织化学验证了其具有良好的抗原结合性。在增殖试验和划痕试验中,与对照组相比,HIF-1α纳米抗体抑制了B16细胞的增殖和迁移,下调了靶基因VEGF的表达,并使细胞增殖和迁移相关蛋白Ras、ERK、RAC和RAF的表达量下调。预测HIF-1α纳米抗体进入B16细胞内,与抗原结合,通过下游靶基因VEGF下调RAs、ERK、RAC、RAF的表达,从而对细胞增殖和迁移起抑制作用,可作为黑色素瘤治疗的新靶点。