非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析

作     者：户鑫兵 王轩莹 宋昱庆 田占成 关贵全 苟惠天 罗建勋 殷宏 独军政 HU Xinbing;WANG Xuanying;SONG Yuqing;TIAN Zhancheng;GUAN Guiquan;GOU Huitian;LUO Jianxun;YIN Hong;DU Junzheng

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年第54卷第3期

页      面：350-356页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFD1800500) 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(1610312021014) 甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024) 甘肃省科技厅项目(22CX8NA011) 农业科技创新工程项目(CAASASTIP-2016-LVRI) 

主　　题：非洲马瘟病毒 AHSV NS1蛋白 昆虫细胞表达 抗原性 

摘      要：非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AHSV亚单位疫苗的组成成分具有一定应用前景。本试验实现了AHSV NS1蛋白在昆虫细胞中成功表达并验证其具有良好的抗原性,这为进一步研究AHSV NS1蛋白的生物学功能和亚单位疫苗开发奠定了基础。