PML-RARα245与hGM-CSF双基因DNA疫苗的构建与表达

作     者：胡刚 周羽竝 岑东芝 杨力建 陈少华 李扬秋 

作者机构：惠东县人民医院内二科广东省516300 暨南大学医学院血液病研究所 暨南大学医学院生化教研室 暨南大学再生医学教育部重点实验室 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2013年第39卷第8期

页      面：878-881,F0002页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：广东省科技计划(2005B50301016) 广东省医学科研基金(A2012757) 惠州市科技计划(2011Y202) 

主　　题：PML-RARα融合基因 hGM-CSF基因 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗 

摘      要：目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点A和B中,构建真核双表达载体。用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性。将重组质粒转染K562细胞,利用RT-PCR和点杂交技术检测重组质粒在真核细胞中的转录和翻译情况。结果双酶切结果证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列完全正确。该重组质粒能够在真核细胞中正常转录和翻译。结论成功构建了含有PML-RARα245及hGM-CSF的双表达载体,为筛选合适的抗原片段用于构建治疗急性早幼粒细胞白血病的PML-RARαDNA疫苗提供重要资料。