本氏烟草NbEHD1基因的生物信息学分析、CRISPR/Cas9载体构建及遗传转化

作     者：白璐 辛翠花 刘乐乐 王俊杰 简磊 邵玉涛 裴海霞 郭江波 BAI Lu;XIN Cuihua;LIU Lele;WANG Junjie;JIAN Lei;SHAO Yutao;PEI Haixia;GUO Jiangbo

作者机构：内蒙古科技大学生命科学与技术学院内蒙古包头014010 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2023年第38卷第5期

页      面：77-83页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071001[理学-植物学] 07[理学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：内蒙古自然科学基金项目(2022LHMS03013) 国家自然科学基金项目(32060498) 

主　　题：本氏烟草 NbEHD1 生物信息学分析 CRISPR/Cas9 

摘      要：为了研究本氏烟草NbEHD1基因的生物学功能,采用生物信息学方法对其基因结构、蛋白保守结构域、磷酸化位点、亚细胞定位及进化关系等多个方面进行预测。结果表明,本氏烟草NbEHD1编码序列全长1638 bp,其基因组序列包含16个外显子和15个内含子。NbEHD1蛋白大概率定位于细胞质中,无信号肽,无跨膜区,蛋白序列有42个磷酸化位点。NbEHD1属于P-loop_NTPase超家族,具有EHD家族特有保守结构域。系统进化关系结果表明,本氏烟草NbEHD1与马铃薯、番茄的EHD序列亲缘关系较近。经与SGN数据库中本氏烟草测序数据比对,获得NbEHD1预测的全序列并设计基因特异性引物,扩增得到其序列全长。在获得NbEHD1 CRISPR/Cas9基因编辑载体后,采用农杆菌介导的方法,将此载体成功转化到本氏烟草叶片,经鉴定成功获得T_(0)阳性植株16株,为进一步确定NbEHD1基因的生物学功能提供了研究材料。