miR409-3-p通过靶向CACNB2调控糖尿病视网膜病变作用机制研究

作     者：罗宁 王玲玲 LUO Ning;WANG Lingling

作者机构：南京市浦口区中医院内分泌科江苏南京211800 南京市浦口区中医院眼科江苏南京211800 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2023年第44卷第20期

页      面：2508-2514页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

基　　金：江苏省优势学科建设工程项目(YSHL0803-213)。 

主　　题：miR-409-3p CACNB2 糖尿病视网膜病变 人视网膜血管内皮细胞 凋亡 炎症 

摘      要：目的探讨微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)氧化应激、凋亡、炎症的影响及作用机制。方法将对数期的HRCEC细胞分为对照组、高渗葡萄糖(HG)组、HG+miR-con组、HG+miR-409-3p组、HG+si-con组、HG+si-CACNB2组、HG+miR-409-3p+pcDNA和HG+miR-409-3p+pcDNA-CACNB2组。采用荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-409-3p的相对表达量,Western blotting(WB)法检测L-型电压依赖型钙通道β(CACNB2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子水平,酶标仪及试剂盒检测氧化应激相关指标,双荧光素酶检测(LRA)验证miR-409-3p与CACNB2调控关系。结果HG组miR-409-3p相对表达量低于对照组,CACNB2 mRNA和蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。miR-409-3p可靶向结合CACNB2,在HRCEC细胞中负向调控CACNB2的表达。与HG+miR-con组相比,HG+miR-409-3p组的乳酸脱氢酶(LDH)及谷胱甘肽(GSH)水平升高(P0.01),CACNB2蛋白表达量、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)水平降低(P0.01);与HG+miR-con组相比,HG+miR-409-3p组Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达量,细胞凋亡率,白细胞介素(IL)-6、IL-18及IL-1β水平均降低,同时,细胞间黏附分子(ICAM)蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P0.01)。敲减CACNB2具有相似的作用,过表达CACNB2可逆转miR-409-3p过表达对HRCEC细胞氧化应激、细胞凋亡、炎症反应的影响。结论miR-409-3p抑制HRCEC细胞的氧化应激、凋亡、炎症与下调CACNB2表达有关。