Hsa_circ_0000392靶向miR-145-5p/CRKL轴调控细胞外调节蛋白激酶通路影响宫颈癌的辐射敏感性

作     者：田君 王宁 王琛 吴大鹏 王晨辉 丁肖杰 王玙珂 Tian Jun;Wang Ning;Wang Chen;Wu Dapeng;Wang Chenhui;Ding Xiaojie;Wang Yuke

作者机构：河南大学淮河医院妇科开封475001 河南大学淮河医院放疗科开封475001 

出 版 物：《中华肿瘤杂志》 (Chinese Journal of Oncology)

年 卷 期：2023年第45卷第10期

页      面：879-891页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：2018年河南省科技攻关项目(2020086) 河南省科技攻关计划(182102311175) 

主　　题：宫颈肿瘤 hsa_circ_0000392 miR-145-5p CT10激酶调节子样蛋白 细胞外调节蛋白激酶信号通路 放疗敏感性 

摘      要：目的探讨hsa_circ_0000392(circ_0000392)对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响及其潜在作用机制。方法收集2016—2019年于河南大学淮河医院首次经病理诊断明确的42例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,根据患者对放射治疗的反应,将癌组织分为放疗敏感和放疗耐受。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测宫颈癌放疗敏感和放疗耐受肿瘤组织及宫颈癌Hela、SiHa细胞中circ_0000392、miR-145-5p、CT10激酶调节子样蛋白(CRKL)的表达。将siRNA circ_0000392、miR-145-5p mimic、miR-145-5p inhibitor、pcDNA 3.1-CRKL及其阴性对照分别转染至Hela和SiHa细胞,细胞经辐射诱导后,采用克隆形成实验检测细胞存活能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Bcl-2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000392、miR-145-5p和CRKL之间的靶向关系。裸鼠成瘤实验观察circ_0000392对宫颈癌体内放疗敏感性的影响。结果circ_0000392和CRKL在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中均呈高表达,miR-145-5p在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中呈低表达(均P0.05)。si-circ_0000392#1+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(78.67±10.97)个和(71.00±9.54)个,均低于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(176.00±22.27)个和(158.33±17.56)个,均P0.05],细胞凋亡率分别为(41.55±3.40)%和(31.41±3.29)%,均高于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(15.91±1.37)%和(13.70±1.89)%,均P0.05],si-circ_0000392#1+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于si-Ctrl+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平低于si-Ctrl+6 Gy组(均P0.05)。si-circ_0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(171.33±25.01)个和(137.00±21.66)个,均高于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(84.67±17.79)个和(71.00±11.00)个,均P0.05],细胞凋亡率分别为(17.41±2.58)%和(15.96±1.25)%,均低于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(40.29±2.92)%和(30.82±2.34)%,均P0.05],si-circ_0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平高于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组(均P0.05)。circ_0000392能够与miR-145-5p靶向结合,而CRKL是miR-145-5p的下游靶基因。miR-145-5p mimic+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(74.33±10.02)个和(66.00±12.17)个,均低于mimic NC+6 Gy组[分别为(197.67±17.21)个和(157.67±11.59)个,均P0.05],细胞凋亡率分别为(45.58±2.16)%和(32.10±3.55)%,均高于mimic NC+6 Gy组[分别为(15.85±2.45)%和(13.99±1.69)%,均P0.05],miR-145-5p mimic+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于mimic NC+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平低于mimic NC+6 Gy组(均P0.05)。miR-145-5p mimic+pcDNA-CRKL+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(158.00±15.88)个和(122.33±13.65)个,均高于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(71.33±8.02)个和(65.67±12.22)个,均P0.05],细胞凋亡率分别为(19.50±3.45)%和(17.04±0.94)%,均低于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(44.33±2.36)%和(32.05±2.76)%