基于PI3K/Akt通路探究蒙古羊ADAMTS1基因的作用机制

作     者：陈晓良 赵梦瑶 李秀男 苏乐德 田瑛 菅瑞珍 巴音吉日嘎拉 杨燕燕 CHEN Xiaoliang;ZHAO Mengyao;LI Xiunan;SU Lede;TIAN Ying;JIAN Ruizhen;BAYIN Jiri Gala;YANG Yanyan

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 内蒙古农牧业科学院畜牧研究所呼和浩特010031 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第50卷第9期

页      面：3459-3468页

学科分类：08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：内蒙古自治区自然基金项目(2020MS03062)。 

主　　题：蒙古羊 ADAMTS1基因 PI3K/Akt通路 双胎 单胎 发情周期 

摘      要：【目的】基于PI3K/Akt通路研究含凝血酶敏感素基序的去解联金属蛋白酶1(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1,ADAMTS1)在产双胎和单胎蒙古羊发情周期不同阶段卵巢内的表达规律,探究ADAMTS1基因影响蒙古羊繁殖性状的作用机制。【方法】选取经产2次的双胎和单胎蒙古羊共40只,自然发情,确定母羊发情期和间情期,分为双胎发情期、双胎间情期、单胎发情期和单胎间情期组,每组各10只羊。利用注射器抽取2~3岁蒙古羊颗粒细胞,分为对照组和试验组,对照组不添加药物,试验组添加15μmol/L LY294002处理颗粒细胞,分别在24、48和72 h测定细胞活力。通过实时荧光定量PCR技术检测母羊卵巢组织和颗粒细胞内ADAMTS1、PI3K、PTEN、Akt、RPS6、Bcl-2和BAX基因的相对表达量;通过Western blotting技术检测卵巢和颗粒细胞内ADAMTS1、PI3K和Akt蛋白的表达丰度。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,双胎发情期组ADAMTS1、Bcl-2基因表达量均显著高于其余各组(P0.05);双胎发情期组和双胎间情期组PI3K、Akt和PTEN基因表达量均显著高于单胎发情期组和单胎间情期组(P0.05);单胎间情期组RPS6基因表达量显著低于其余各组(P0.05);间情期与发情期相比,BAX基因表达显著上调(P0.05)。Western blotting结果显示,双胎发情期ADAMST1蛋白表达量显著高于其余各组(P0.05);双胎组与单胎组相比,PI3K和Akt蛋白均表达上调,其中,双胎发情期和双胎间情期PI3K蛋白表达量均显著高于单胎发情期组和单胎间情期组(P0.05),双胎间情期Akt蛋白表达量最高,显著高于其余各组(P0.05)。与对照组相比,试验组蒙古羊颗粒细胞形态异常,细胞增殖缓慢,且ADAMTS1、PI3K和Akt基因和蛋白的相对表达量均显著降低(P0.05)。【结论】ADAMTS1、PI3K和Akt基因和蛋白在蒙古羊卵巢和颗粒细胞内的表达趋势一致,呈正向相关关系,证明ADAMTS1基因PI3K/Akt轴在蒙古羊产双胎性状中发挥重要作用。