紫草素通过Keap1/Nrf2信号通路介导的自噬对卵巢癌SK-OV-3细胞的影响

作     者：方堃 邱芳 丁娅妮 邓丹妮 覃庆锋 FANG Kun;QIU Fang;DING Yani;DENG Danni;QIN Qingfeng

作者机构：贵州省人民医院妇科贵州贵阳550002 

出 版 物：《中药新药与临床药理》 (Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology)

年 卷 期：2023年第34卷第8期

页      面：1053-1060页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：贵州省科技计划项目(黔科合支撑一般040)。 

主　　题：卵巢癌 SK-OV-3细胞 顺铂 紫草素 Keap1/Nrf2通路 自噬 

摘      要：目的探讨紫草素通过Keap1/Nrf2信号通路介导的自噬对卵巢癌SK-OV-3细胞的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖情况,计算顺铂、紫草素及在紫草素作用下顺铂的半数抑制浓度(IC50),以确定后续干预浓度。采用pcDNA3-EGFP-C4-Nrf2质粒及其阴性对照对SK-OV-3细胞进行转染,分别记为OE-Nrf2组、NC-Nrf2组。将SK-OV-3细胞分为对照组、顺铂(14μmol·L^(-1))组、顺铂(14μmol·L^(-1))+紫草素(9μmol·L^(-1))组,以及将转染后细胞分为顺铂(14μmol·L^(-1))+紫草素(9μmol·L^(-1))+NC-Nrf2组、顺铂(14μmol·L^(-1))+紫草素(9μmol·L^(-1))+OE-Nrf2组;培养48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖抑制情况;RT-qPCR法检测细胞Nrf2mRNA表达情况;Transwell实验检测细胞侵袭能力;AO染色法检测细胞自噬情况;Western Blot法检测细胞增殖、侵袭及自噬相关蛋白(CyclinD1、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin-1、LC3II/I、ULK、Keap1、Nrf2、p62)表达情况。结果(1)与对照组比较,紫草素4~20μmol·L^(-1)浓度组的SK-OV-3细胞活力明显降低(P0.05),紫草素对SK-OV-3细胞的IC50为9.04μmol·L^(-1);单用顺铂10~80μmol·L^(-1)浓度组及紫草素(9μmol·L^(-1))+顺铂10~80μmol·L^(-1)浓度组的SK-OV-3细胞活力均明显降低(P0.05)。与单用顺铂组比较,紫草素(9μmol·L^(-1))+顺铂10~80μmol·L^(-1)浓度组的SK-OV-3细胞活力均明显降低(P0.05)。单用顺铂对SK-OV-3细胞的IC50为28.49μmol·L^(-1);与紫草素(9μmol·L^(-1))联用时,顺铂对SK-OV-3细胞的IC50为14.00μmol·L^(-1)。(2)与NC-Nrf2组比较,OE-Nrf2组SK-OV-3细胞的Nrf2 mRNA表达水平明显升高(P0.05)。与对照组比较,顺铂组SK-OV-3细胞的Nrf2 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.05),Keap1蛋白表达水平明显降低(P0.05);顺铂组、顺铂+紫草素组SK-OV-3细胞的增殖抑制率明显升高(P0.05),CyclinD1、PCNA蛋白表达明显下调(P0.05);单个视野细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P0.05);细胞的红色荧光自噬囊泡明显增多,Beclin-1、LC3II/I、ULK1、p62蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与顺铂组比较,顺铂+紫草素组SK-OV-3细胞的Nrf2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.05),Keap1蛋白表达水平明显升高(P0.05);细胞的增殖抑制率明显升高(P0.05),CyclinD1、PCNA蛋白表达明显下调(P0.05);单个视野细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P0.05);细胞的红色荧光自噬囊泡减少,Beclin-1、LC3II/I、ULK1、p62蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与顺铂+紫草素+NC-Nrf2组比较,顺铂+紫草素+OE-Nrf2组SK-OV-3细胞的增殖抑制率明显降低(P0.05),CyclinD1、PCNA蛋白表达明显上调(P0.05);单个视野细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P0.05);细胞的红色荧光自噬囊泡增多,Beclin-1、LC3II/I、ULK1、p62蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论紫草素可降低顺铂对卵巢癌SK-OV-3细胞的IC50,提高其对顺铂的敏感性,并抑制其增殖、侵袭能力,可能与其抑制Keap1/Nrf2通路介导的自噬有关。