Akt在中华绒螯蟹免疫中的功能

作     者：许青松 李兵 杨冰慧 马金龙 洋雯 曲琛 XU Qingsong;LI Bing;YANG Binghui;MA Jinlong;YANG Wen;QU Chen

作者机构：大连民族大学生命科学学院生物技术与资源利用教育部重点实验室 大连海洋大学水产与生命学院 

出 版 物：《水产学报》 (Journal of Fisheries of China)

年 卷 期：2023年第47卷第9期

页      面：175-183页

核心收录：

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金(31372347) 大连民族大学服务国家战略专项(0970-110007) 大连民族大学人才引进科研启动基金(110181)~~ 

主　　题：中华绒螯蟹 蛋白激酶B 基因表达 免疫 细胞凋亡 

摘      要：Akt作为PI3K-AKT信号通路的核心分子，在细胞增殖、代谢、发育和存活等过程中发挥重要作用。本研究采用特异性引物及PCR技术，克隆获得了中华绒螯蟹Akt基因(EsAkt)并进行生物信息学分析，实时定量PCR技术检测了EsAkt在中华绒螯蟹不同组织和不同免疫刺激后的表达水平，免疫荧光技术检测了EsAkt蛋白的细胞定位，双链RNA干扰技术分析了EsAkt干扰后凋亡基因的变化。结果显示，EsAkt分子包含PH结构域、中心催化结构域(S＿TKc)和羧基端疏水结构域(S＿TK＿X) 3个保守的结构域。EsAkt在所有被检测的组织中呈现组成型表达，且在免疫相关组织(如肝胰腺、鳃和血淋巴细胞)中的表达量显着高于胃和肠道。EsAkt蛋白主要以弥散状的形式分布在细胞质中。中华绒螯蟹注射脂多糖(LPS)和嗜水气单胞菌后，显著诱导EsAkt转录本的表达，LPS免疫刺激12 h后，EsAkt响应达到峰值，为对照组的4.35倍，刺激48 h后，EsAkt的mRNA表达水平有所降低，但仍是对照组2.62倍。嗜水气单胞菌免疫刺激6 h后，EsAkt响应达到峰值，为对照组的9.05倍，刺激48 h后，EsAkt的mRNA表达量回落到正常水平。双链RNA干扰EsAkt后，EsAkt的mRNA表达量为对照组的0.38倍，而凋亡相关基因EsCaspase-3-like表达水平显著上调，为对照组的2.69倍。研究表明，EsAkt基因在中华绒螯蟹免疫中发挥重要作用，参与了机体对细菌引起的免疫应激过程。本研究丰富了中华绒螯蟹PI3K-AKT信号通路研究的基本资料，为进一步研究甲壳动物免疫防御机制奠定了基础。