连翘水提液体外抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对细胞凋亡的保护作用

作     者：张凯照 许泽锴 肖仕鑫 郑钰 胡会 崔红杰 吴异健 黄小红 ZHANG Kaizhao;XU Zekai;XIAO Shixing;ZHENG Yu;HU Hui;CUI Hongjie;WU Yijian;HUANG Xiaohong

作者机构：福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)福州350002 中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室(福建农林大学)福州350002 福建省兽医中药与动物保健重点实验室(福建农林大学)福州350002 

出 版 物：《应用与环境生物学报》 (Chinese Journal of Applied and Environmental Biology)

年 卷 期：2023年第29卷第2期

页      面：364-369页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：福建省中青年教师教育科研项目(JAT200108) 福建省自然科学基金项目(2021J01080)资助 

主　　题：连翘 番鸭呼肠孤病毒 病毒增殖 细胞凋亡 

摘      要：连翘是中药配方的重要组分之一,具有良好的抗病毒活性,但其对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的作用尚未得到深入评估.为评估连翘体外MDRV增殖及对鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞凋亡的保护作用,通过四唑盐(MTT)法检测连翘水提液的安全浓度,并从3种给药方式中筛选出连翘水提液的最佳给药方式.在最佳给药方式下,通过半数细胞培养感染剂量(TCID_(50))检测MDRV在DF-1细胞的增殖情况,并采用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因mRNA的表达情况.结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度为0.25-4 mg/mL,最佳给药方式是先感染病毒再加中药,在此给药方式下,连翘水提液能极显著降低MDRV在24-48 h的病毒滴度(P0.01).与对照组相比,MDRV攻毒组细胞凋亡率极显著升高(P0.01),内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著上调(P0.01),凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著上调(P0.01)而Bcl-2表达极显著下调(P0.01);与MDRV攻毒组相比,连翘水提液处理组细胞凋亡率极显著降低(P0.01),内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著下调(P0.01),凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著下调(P0.01)而Bcl-2表达极显著上调(P0.01).可见,连翘可以抑制MDRV在DF-1细胞中的增殖,并对MDRV引起DF-1细胞凋亡起到了缓解作用,具有良好抗病毒的活性,结果为进一步筛选出抗MDRV的候选药物提供了基础数据.