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猪伪狂犬病病毒变异株HN1201 gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

Preparation and identification of monoclonal antibody against gE protein of porcine pseudorabies virus variant strain HN1201

作     者:牛欣蕊 付朋飞 鲁维飞 张超 褚贝贝 王江 曾磊 NIU Xinrui;FU Pengfei;LU Weifei;ZHANG Chao;CHU Beibei;WANG Jiang;ZENG Lei

作者机构:河南农业大学动物医学院河南郑州450046 河南农业大学农业农村部动物生化与营养重点实验室河南郑州450046 河南农业大学河南省动物生长发育调控重点实验室河南郑州450046 河南城建学院生命科学与工程学院河南平顶山467036 

出 版 物:《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期:2023年第43卷第8期

页      面:1604-1611,1617页

学科分类:090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基  金:河南省自然科学基金资助项目(202300410213) 河南省教学改革资助项目(2021SJGLX351) 

主  题:PRV HN1201 gE蛋白 单克隆抗体 IgG2a IgM 

摘      要:旨在获得用于伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)实验室检测和临床诊断所需的PRV gE单克隆抗体,用灭活的PRV变异株PRV HN1201免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(immune peroxidase monolayer assay,IPMA)和免疫印迹试验(Western blot)筛选,获得2株分泌PRV gE抗体的杂交瘤细胞(1-F11-3、3-E11-3),抗体亚类分别为IgG2a和IgM,轻链均为Kappa链。间接免疫荧光试验(IFA)检测结果显示单克隆抗体可与不同PRV毒株反应,而不与PRV Bartha K61反应;Western blot、IPMA、IFA试验结果显示2株单克隆抗体均能特异性识别PRV gE蛋白,与其他病毒无交叉反应。Western blot试验鉴定2株抗体的抗原识别序列分别为^(64)GDDRRAGFGSALASLR^(79)和^(156)PPEVPRLRRGPPIVTPERWS^(175)。腹水纯化后的1-F11-3、3-E11-3抗体用于Western blot检测的最高稀释比分别为1∶14000和1∶12000,1-F11-3的IFA效价为2^(-14),3-E11-3不可用于IFA检测。结果表明,本研究制备的PRV gE抗体特异性强、灵敏度高,为建立快速、高效的PRV免疫学检测方法奠定了基础。

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