不同种类RNA作为TSD推断内参基因的研究筛选和评估

作     者：郭顺天 郑刘霞 孙启凡 赵一霞 季安全 叶健 陈雯莉 胡胜 Guo Shuntian;Zheng Liuxia;Sun Qifan;Zhao Yixia;Ji Anquan;Ye Jian;Chen Wenli;Hu Sheng

作者机构：华中农业大学生命科学技术学院湖北武汉430070 公安部鉴定中心现场物证溯源技术国家工程实验室法医遗传学公安部重点实验室北京100038 

出 版 物：《中国法医学杂志》 (Chinese Journal of Forensic Medicine)

年 卷 期：2023年第38卷第4期

页      面：413-419,424页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 0838[工学-公安技术] 100105[医学-法医学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2022YFC3341002) 公安部鉴定中心基本科研业务费项目(2022JB021) 

主　　题：法庭科学 内参基因 qPCR 核糖核酸(RNA) 离体时间(TSD) 

摘      要：目的准确估算血迹离体时间能为刑事案件调查提供信息或线索。本文利用qPCR技术检测血迹中RNA的降解情况,进而筛选并评估适用于血迹离体时间推断的内参基因(reference genes)。方法本研究制备10名志愿者0~90 d区间范围内7个时间节点共70份样本的总RNA为实验材料,基于其中6名志愿者的样本的qPCR数据,使用geNorm和NormFinder算法对14个候选内参基因(let-7g-5p,let-7i-5p,miR-191-5p,miR-484,miR-103a-5p,miR-423-5p,PPIA,ACTB,5SrRNA,18SrRNA,miR-93-5p,U6b,SNORD24,SNORD38B)进行稳定性评估,筛选内参基因及其使用方案。选取全部10名志愿者70份样本,验证内参基因及其使用方案的校正效果。结果qPCR检测显示miRNA在血迹离体后90 d范围内表现出的稳定性较强。综合使用geNorm和NormFinder两种算法获得的内参基因使用方案为:以let-7g-5p为单基因内参,或以let-7g-5p、U6b和miR-191-5p组合为三内参基因。70个样本对两个内参基因使用方案的校正能力验证显示,多基因组合内参方案的三次方程模型能更准确推断血液斑迹的离体时间。结论本研究首先推荐以ACTB为标记,以let-7g-5p、U6b、miR-191-5p组合的三内参基因三次方程校正模型用于血迹离体时间推断检验鉴定技术研发;在考虑提高检验效率、简化实验流程等需求而需要选择单基因作为内参基因时,可以选择ACTB为标记,使用let-7g-5p为内参基因的三次方校正模型。