卵清蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

作     者：李妮 朱文勇 宋绍辉 马磊 高菁霞 廖国阳 李卫东 LI Ni;ZHU Wenyong;SONG Shaohui;MA Lei;GAO Jingxia;LIAO Guoyang;LI Weidong

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2023年第36卷第7期

页      面：850-854,861页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81860281) 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2020-l2M-2-014) 中国医学科学院医学科技创新项目(2016-l2M-3-026)。 

主　　题：卵清蛋白 鸡胚 双抗体夹心ELISA 

摘      要：目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,以用于流感疫苗中OVA含量的测定。方法 以兔抗OVA多克隆抗体作为包被抗体,HRP标记的兔抗OVA多克隆抗体作为检测抗体建立OVA双抗体夹心ELISA检测方法。对包被抗体浓度(2、1、0.5、0.25μg/mL)、酶标抗体浓度(0.5、0.25、0.125μg/mL)、封闭液(1%BSA、2%BSA、1%BSA+1%蔗糖、2%BSA+2%蔗糖,以未封闭为对照)进行优化,并确定Cut-off值作为判断标准。对方法的线性范围及检测下限、特异性、重复性和准确度进行验证。结果 该方法的最适检测条件为:包被抗体浓度1μg/mL,酶标抗体浓度0.25μg/mL;封闭液为2%BSA+2%蔗糖;Cut-off值为0.051 66。该方法线性范围为5~0.313 ng/mL,检测下限为0.078 ng/mL;与流感病毒、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、Vero细胞上清液等均不发生反应;板内变异系数(CV)在2.562%~13.887%之间,板间CV在4.000%~16.497%之间;该方法检测结果与德国SERAMUN OVA定量检测试剂盒检测结果的符合率在93.79%~107.05%之间。结论 建立的OVA双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、重复性、线性范围及准确度,且操作简便、成本低,可用于OVA的定量检测。