rnc基因的高表达及核糖核酸酶Ⅲ的纯化

作     者：陈苏民 Court D.L. 

作者机构：第四军医大学生物化学教研室 美国NIH/NCI-FCRF-BRI染色体生物学实验室 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：1992年第8卷第2期

页      面：116-122页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：核糖核酸酶Ⅲ rnc基因 基因表达 

摘      要：根据大肠杆菌中核糖核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ)含量很低的原因是RNaseⅢ能作用于自身基因(rnc)转录物5 端、负反馈调控其自身合成,设计RNaseⅢ高表达的方案。去除rnc基因5 侧能转录生成可被RNaseⅢ降解的RNA结构的序列,保留整个rnc基因及其5 侧的天然翻译起始序列,将之置于λP_L启动子控制下,所构建的质粒在大肠杆菌中经诱导后高表达出RNase Ⅲ,其含量达细胞总蛋白质量的65%以上,并在菌体内形成包涵体。利用RNaseⅢ溶解度变化的特点,在低温、低盐条件中裂菌,并洗涤沉淀,在室温、高盐条件下溶解、过Q-Sepharose FF柱,获得具有良好活性、电泳纯的RNase Ⅲ,收获量为10—12mg/100ml培养液。同时还发现RNase Ⅲ具有特异性结合ATP的活性。