一组可提供AAV载体复制和包装功能的重组HSV-1

作     者：伍志坚 吴小兵 侯云德 

作者机构：中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2002年第16卷第1期

页      面：74-76页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家"八六三"高科技发展计划基因治疗重大关键技术资助项目 ( 86 3 BH0 3 0 5 0 2 ) 国家攀登计划资助项目 

主　　题：遗传重组 腺病毒科 人疱疹病毒 AAV载体复制 包装功能 

摘      要：目的 构建一组具有AAV载体复制和包装功能的重组HSV 1,从中选出功能较强者用于重组AAV的生产。方法 采用一套含有HSV 1基因组的粘粒系统构建重组HSV 1。首先将 2型腺病毒伴随病毒 (AAV 2 )rep基因的起始密码子ATG人工定点突变成ACG ;然后将自身启动子控制下的AAV 2rep(起始密码子突变或未突变 )和cap基因分别插入粘粒上HSV 1的UL2基因或UL44基因 ,构建成重组粘粒cos6 rmc ΔUL2、cos5 6 rc ΔUL44cos5 6 rmc ΔUL44 ;将重组粘粒上的HSV 1片段分别与HSV 1的其余片段进行同源重组 ,得到 3株重组HSV 1。连同过去报道的一株重组HSV 1一起 ,分别命名为HSV1 rc ΔUL2、HSV1 rmc ΔUL2、HSV1 rc ΔUL44、HSV1 rmc ΔUL44。结果 4株重组HSV 1经PCR鉴定均含有rep基因 ,分别感染携带绿色荧光蛋白 (GFP)基因的AAV载体细胞株后均能产生重组AAV。重组AAV可在BHK 2 1细胞中表达GFP。HSV1 rc ΔUL2和HSV1 rmc ΔUL2对AAV载体的包装能力明显强于HSV1 rc ΔUL44和HSV1 rmc ΔUL44。结论 构建的 4株重组HSV 1均具有复制和包装重组AAV的能力。其中HSV1 rc ΔUL2和HSV1 rmc ΔUL2功能较强 。