m^(6)A甲基化转移酶3在糖尿病性白内障发病中的作用机制

作     者：陈思 叶巍 唐韵 王文喆 葛轶睿 王雪莹 黄振平 Si Chen;Wei Ye;Yun Tang;Wen-Zhe Wang;Yi-Rui Ge;Xue-Ying Wang;Zhen-Ping Huang

作者机构：东南大学医学院中国江苏省南京市210003 东部战区总医院眼科中国江苏省南京市210002 南京大学医学院中国江苏省南京市210008 

出 版 物：《国际眼科杂志》 (International Eye Science)

年 卷 期：2023年第23卷第8期

页      面：1250-1259页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主　　题：糖尿病性白内障 甲基化转移酶3(METTL3) N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A) 上皮-间质转分化 

摘      要：目的:探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)甲基化转移酶3(METTL3)在糖尿病性白内障发病中的作用机制。方法:用低糖和高糖培养基培养人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)24h后,采用RT-qPCR和Western blot实验检测细胞的上皮-间质转分化(EMT)指标:E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)、紧密连接蛋白1(ZO-1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化情况;transwell和划痕实验检测细胞迁移能力。采用免疫荧光染色检测人晶状体前囊膜组织中METTL3的表达量及定位,m^(6)A dot blot实验检测在低糖和高糖培养基中培养24h细胞的m^(6)A甲基化水平,RT-qPCR和Western blot实验检测细胞中METTL3的RNA和蛋白表达量。加入METTL3抑制剂的培养基中培养24h的细胞,RT-qPCR和Western blot实验检测EMT指标的变化情况;m^(6)A dot blot实验检测细胞m^(6)A甲基化水平;Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力。免疫荧光染色检测细胞中转化生成因子β(TGFβ1)的表达;RT-qPCR和Western blot实验检测细胞中的TGFβ1和SNAIL的表达量。结果:与低糖条件相比,高糖条件能够促进细胞EMT的发生,促进METTL3的表达和上调了细胞总RNA的m^(6)A甲基化水平(P0.05)。高糖能够促进细胞的迁移能力。糖尿病性白内障患者晶状体前囊膜中METTL3表达较单纯年龄相关性白内障患者增高。与高糖+DMSO组相比,加入METTL3抑制剂STM2457,能够抑制细胞的EMT发生,抑制TGFβ1和SNAIL的表达,抑制细胞总RNA的m^(6)A甲基化水平(均P0.05)。加入METTL3抑制剂STM2457后细胞迁移能力较高糖+DMSO组降低。结论:m^(6)A甲基化转移酶METTL3通过激活TGFβ1/SNAIL通路促进了在高糖条件下人晶状体上皮细胞的EMT发生从而诱导糖尿病性白内障的发生。