基于猪圆环病毒2型复制子的复制型表达载体的构建

作     者：蔡晓雪 李俊 李章勋 杜红旭 曹立亭 马跃 CAI Xiaoxue;LI Jun;LI Zhangxun;DU Hongxu;CAO Liting;MA Yue

作者机构：西南大学动物医学院重庆402460 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2023年第39卷第7期

页      面：2634-2643页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：DNA复制子 表达载体 猪圆环病毒2型 DNA疫苗 

摘      要：DNA疫苗在动物体内表达抗原基因的水平是决定DNA疫苗免疫效果的关键,而提高DNA疫苗抗原基因表达水平的途径之一是利用可在动物细胞内复制的质粒作为载体。本研究利用pcDNA3.1构建了1个基于猪圆环病毒2(porcine circovirus 2,PCV2)复制子的复制型DNA疫苗载体pCMVori,再将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因分别克隆入pCMVori和对照质粒pcDNA3.1中,然后分别转染PK-15细胞,48 h后观察两组转染细胞EGFP表达情况后分别提取细胞质粒和RNA。利用Bcl I酶切前、后的质粒为模板通过定量PCR检测质粒的复制效率,并通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测PCV2复制子的Rep基因转录产物。通过Image J软件分析两组转染细胞的平均荧光强度,并通过定量RT-PCR定量检测两组转染细胞的EGFP基因转录水平。结果显示,pCMVori在细胞内48 h的复制效率达到136%,RT-PCR结果证实Rep和Rep’均有转录。pCMVori-EGFP转染细胞的平均荧光强度比pcDNA3.1-EGFP的高39.14%,定量RT-PCR检测结果显示,前者的EGFP转录水平也比后者高40%。本研究结果表明,所构建的复制型DNA疫苗载体pCMVori可在真核细胞中独立复制,克隆的目的基因的表达水平也因此获得提升,为构建复制型DNA疫苗奠定了基础。