耳念珠菌重组酶聚合酶扩增检测方法的建立与评价

作     者：付雷雯 王玲 乐婷婷 郭辉杰 杨钧 陈清 刘志华 胡静 Fu Leiwen;Wang Ling;Le Tingting;Guo Huijie;Yang Jun;Chen Qing;Liu Zhihua;Hu Jing

作者机构：南方医科大学珠江医院医院感染管理科广东广州510280 南方医科大学公共卫生学院流行病学系广东广州510515 南方医科大学南方医院感染内科广东广州510515 

出 版 物：《疾病监测》 (Disease Surveillance)

年 卷 期：2023年第38卷第6期

页      面：729-734页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：广东省应用与基础应用研究基金项目(No.2020A1515010333) 

主　　题：耳念珠菌 重组酶聚合酶扩增技术 真菌诊断 

摘      要：目的耳念珠菌是一种新出现的多重耐药酵母菌,本研究拟建立基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的耳念珠菌检测方法并评价。方法针对念珠菌5.8S和ITS2基因区域设计耳念珠菌特异性引物和念珠菌通用引物,评价其最低检测限;选取65株菌对其特异度进行评价;同时测定其在非培养条件下对该病原的检出能力。用5种常见念珠菌和耳念珠菌对念珠菌通用RPA检测方法进行评价。结果耳念珠菌特异性RPA检测方法检测下限为103拷贝/反应,与聚合酶链式反应(PCR)检测下限相同,37℃下反应时间20 min,特异度为100.00%。可以在2.5 h内检测出血液中的耳念珠菌,其检测下限为1.02×10^(3)菌落形成单位(CFU)/mL,与PCR检测下限相同。念珠菌通用引物可通过扩增产物大小不同,实现5种常见念珠菌与耳念珠菌的初步鉴别。可在白色念珠菌与耳念珠菌菌量比(5∶1,1∶1,1∶5)的混合感染情况下产生两种易于区分的条带。种易于区分的条带。结论本研究建立的耳念珠菌RPA检测方法,具有简便、快速、成本低的特点,表现出了较高的灵敏度与特异度,可以实现5种临床常见念珠菌与耳念珠菌的初步鉴别诊断。