重组anti－CD20 scFv／CD80／CD28/ζ非复制型逆转录病毒的构建及其在Jurkat细胞株中的表达

作     者：胡永仙 俞康 谭映霞 沈志坚 钱红兰 梁彬 单大铭 

作者机构：温州医学院附属第一医院血液内科 医学科学研究所浙江温州325000 美国华盛顿大学Bio-Rad实验室主任 

出 版 物：《中国应用生理学杂志》 (Chinese Journal of Applied Physiology)

年 卷 期：2008年第24卷第3期

页      面：343-347页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(302781) 

主　　题：单链抗体 逆转录病毒 PA 317细胞 基因表达 NIH 3T3细胞 Jurkat细胞 

摘      要：目的:构建表达anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ重组非复制型逆转录病毒,转染Jurkat细胞株使其表达目的蛋白。方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/CD80的真核逆转录病毒载体pLNCX质粒上,转染PA317细胞株,收获上清液获非复制型逆转录病毒,感染NI H3T3细胞株,用PCR、流式细胞术检测目的基因在NI H3T3细胞的表达情况,确定病毒滴度。挑取高滴度的包装细胞株收获病毒,感染Jurkat细胞,经G418筛选细胞,用RT-PCR检测目的基因表达情况。结果:经酶切及测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ的成功构建;用PCR能够从逆转录病毒感染的NI H3T3细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段;流式细胞术检测显示该目的基因能够在NI H3T3细胞中表达目的蛋白;经RT-PCR,能够从转染的Jurkat细胞株中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段。结论:成功构建高滴度表达anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ非复制型逆转录病毒,并能在Jurkat细胞中表达目的蛋白。