miR-135a-5p靶向抑制Kif3B调控小鼠腭胚突间充质细胞的自噬

作     者：冯文宣 廉舒博 王哲 陈靖 何苇 Feng Wenxuan;Lian Shubo;Wang Zhe;Chen Jing;He Wei

作者机构：遵义医科大学口腔医学院贵州省遵义市563000 遵义医科大学附属口腔医院贵州省遵义市563000 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2024年第28卷第19期

页      面：3003-3011页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1003[医学-口腔医学] 1002[医学-临床医学] 08[工学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100302[医学-口腔临床医学] 100215[医学-康复医学与理疗学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82160176),项目负责人:何苇 遵义医科大学研究生科研基金立项项目(ZYK65),项目负责人:冯文宣 

主　　题：自噬 胚胎腭突间充质细胞 miRNA KIF3B Shh信号通路 腭裂 

摘      要：背景:研究表明,在地塞米松诱导腭裂的小鼠胚胎腭突间充质细胞中miR-135a-5p呈高表达,初级纤毛及其介导的Shh信号通路参与小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。由此猜测miR-135a-5p可能通过初级纤毛及其介导的Shh信号途径调控小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。目的:探讨miR-135a-5p对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的调控作用。方法:体外提取并培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞。细胞转染分别设置为:①对照组、miR-135a-5p阴性对照组、miR-135a-5p模拟物组。②NC+miR-NC组、KIF3B过表达组、miR-135a-5p+KIF3B组。qRT-PCR验证miR-135a-5p、KIF3B的转染效率;透射电镜观察各组细胞中自噬小体/自噬溶酶体的数目;免疫荧光技术测定自噬标记物LC3B的荧光表达程度;Western blot检测KIF3B、LC3和P62的蛋白表达。③miR-135a-5p阴性对照组、SAG处理组、SAG+miR-135a-5p组。qRT-PCR检测Shh信号下游关键转录因子Gli3的mRNA表达水平;Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的蛋白表达。结果与结论:①过表达miR-135a-5p后,细胞内自噬小体/自噬溶酶体数量显著增多(P0.01);LC3B的荧光密度显著升高(P0.01),KIF3B、P62的蛋白表达降低(P0.01),LC3的蛋白表达升高;②过表达KIF3B后,细胞内自噬小体/自噬溶酶体数目明显减少(P0.01),LC3B的荧光密度降低(P0.01),P62的蛋白表达升高(P0.01),LC3的蛋白表达下降(P0.01);miR-135a-5p靶向抑制KIF3B的表达(P0.01),并使自噬小体/自噬溶酶体数目、LC3B的荧光强度以及LC3的蛋白表达得到回升(P0.01),P62的蛋白表达下降(P0.01);③SAG使Gli3的mRNA表达明显升高(P0.01),P62的蛋白表达升高(P0.01),LC3的蛋白表达下降(P0.01);加入miR-135a-5p后,Gli3的mRNA表达显著下降(P0.01),P62的蛋白表达下降(P0.01),LC3的蛋白表达回升(P0.01);④结果表明:miR-135a-5p靶向抑制KIF3B并且可能通过负向调控Shh信号通路促进小鼠胚胎间充质细胞自噬。