塞内卡病毒CH/ZZ/2016株cDNA感染性克隆的构建

作     者：韩宇 王秀明 刘建奇 刘亭岐 乌吉斯古楞 张斌 宋庆庆 关平原 HAN Yu;WANG Xiuming;LIU Jianqi;LIU Tingqi;Wujisiguleng;ZHANG Bin;SONG Qingqing;GUAN Pingyuan

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 金宇保灵生物药品有限公司兽医疫苗国家工程实验室呼和浩特010020 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2023年第31卷第2期

页      面：67-72页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：塞内卡病毒 全长cDNA 转染 病毒拯救 

摘      要：为构建塞内卡病毒(Senecavirus A)CH/ZZ/2016株的感染性克隆,采用RT-PCR技术分3个cDNA片段对SVA/CH/ZZ/2016株全基因组进行扩增,并克隆至pcDNA3.1(+)真核表达质粒中。获得重组质粒pSVA-CH/ZZ经NheⅠ、KpnⅠ酶切及测序鉴定后,转染BHK-21细胞并转至PK-15细胞上进行盲传,直至出现细胞病变(CPE)。对出现CPE的细胞上清液进行RT-PCR扩增、酶切、测序、间接免疫荧光试验鉴定。结果显示,成功构建了含SVA全长cDNA克隆的重组质粒,转染BHK-21细胞经PK-15细胞盲传至F5代出现SVA的典型CPE。细胞上清液经RT-PCR扩增、酶切、测序结果表明拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记。间接免疫荧光试验进一步表明拯救了SVA病毒。病毒蚀斑形成和生长曲线表明,拯救毒株和亲本毒株的复制能力及增殖特性相似。本研究构建的CH/ZZ/2016株感染性克隆为进一步研究SVA的致病机理、基因功能及疫苗的研发奠定基础。